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癌变是正常细胞内基因组的结构和功能异常所形成的。基因的异常改变，细胞核的异常增殖及细胞分化调控机制失去自稳平衡是导致细胞癌变的分子生物学基础。随着肿瘤分子生物学的进展，对癌基因和增殖细胞核抗原（PCNA）在癌组织中表达的研究也日趋深入。本文应用p53单克隆抗体DO-1和PCNA单克隆抗体PC10对90例肺癌进行免疫组化标记，观察其表达特点并探讨其意义。
1 材料与方法
1.1 材料来源 90例肺癌标本均取自我院胸外科近年来手术切除的病例。所有标本取材后用10%甲醛固定，石蜡包埋。每例蜡块连续切片3张，厚度5μm。HE染色切片按WHO分型标准:鳞状细胞癌25例，腺癌35例，小细胞未分化癌23例，大细胞癌7例。
1.2 实验方法 免疫组化染色采用链菌素亲生物素—过氧化物酶法（S-P）。S-P试剂盒及p53、PCNA单抗均购于北京中山生物公司（Sana Cruzpiotechnology产品）。用PBS替代p53和PCNA作为空白对照，用已知p53、PCNA阳性的肺癌切片作为阳性对照。每例切片观察10个具有代表性的高倍视野，以细胞核或浆内呈现棕黄色颗粒者为阳性，并根据两种单抗在切片中阳性反应细胞的比例分为:（+）阳性细胞数<20%;（++）阳性细胞数占20%～50%;（+++）阳性细胞数>50%。
2 观察结果
两种单抗在肺癌细胞内表达特点基本一致，阳染颗粒均位于细胞核内，呈棕黄色，以颗粒型、弥漫型或混合型3种方式表达。部分鳞癌癌巢周边细胞的胞浆内可见p53弱阳性反应。癌旁支气管粘膜、粘膜下腺体两种单抗均为阴性反应，而癌巢周围间质中少量淋巴细胞内PCNA呈阳性反应。90例肺癌组织p53蛋白和PCNA表达的总阳性率分别为77.8%和90.0%。各型肺癌p53蛋白和PCNA阳性表达率见表1，不同分化程度的腺、鳞癌两种单抗阳性表达结果分别见表2，表3。
表1 p53、PCNA在90例肺癌中的表达结果
表2 不同分级鳞癌p53、PCNA阳性率
3 讨论
p53基因是一种抑癌基因，该基因的突变在恶性肿瘤中常见。肺癌中p53基因突变主要是点突变及少量的插入、缺失或蛋白融合 ［1］ 。p53基因的突变，导致蛋白构型改变伴随半衰期延长 ［1］ ，在细胞核中沉积，可达到能用免疫组化方法检出的阈值，由此而检出其蛋白产物就可作为p53基因突变的一个指征 ［2］ 。本文应用S-P法免疫组化技术，观察90例肺癌活检切片中p53蛋白的表达特点，证实了p53蛋白在肺癌组织中有较高的表达率。肿瘤细胞的增殖活性与肿瘤的浸润、转移和预后等关系密切。在原位显示肿瘤细胞核增殖反应的AGNOR、KI67 和PCNA3种方法中，以检测PCNA反应最为方便，客观可靠，已在各类肿瘤研究中广泛应用，并与p53进行了对比观察 ［3］。本文观察PCNA在90例肺癌组织中的总阳性率为90.0%，明显高于p53的表达结果（77.8%），而且肿瘤细胞分化越低，PCNA阳性表达越高，而p53阳性表达率则越低。从而可以看出癌细胞分化越幼稚，其生长繁殖能力越旺盛，肿瘤恶性表型明显增强，转移机会也就越多，预后越差 ［3～5］ 。总之，应用p53蛋白和PCNA观察在肺癌细胞中的表达特点，显示肿瘤细胞基因突变和细胞异型增殖的真实面目，不失为目前对肺癌进行免疫组化研究的最佳标志物，在观察肺癌的分化、增殖、浸润、转移和预后判断等方面有着重要意义。
参考文献
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作者单位:118000辽宁丹东沈阳军区第230医院病理科