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【摘要】 目的 探讨乳腺癌组织中DNA倍体与PCNA、c-erbB-2表达的相关性及意义。方法 采用免疫组织化学（S-P法）法、经典的Feulgen染色法及图像分析技术对85例乳腺癌组织中PCNA、c-erbB-2及DNA倍体进行检测。结果 （1）85例乳腺癌中DNA非整倍体占87.06%（74/85），其中以3C-4C居多，占63.53%（54/85）。浸润性导管癌DNA非整倍体率为87.88%（58/66）;其它类型癌DNA非整倍体率为84.12%（16/19），二者之间差异有显著性（P<0.05）。（2）PCNA阳性表达79例，其中2C占12.66%（10/79），3C-4C占54.33%（43/79），≥5C占32.91%（26/79）。PCNA阳性级别与DNA倍体有相关关系（P<0.001），PCNA阳性级别随DNA倍体增高而增高。（3）c-erbB-2阳性表达77例，其中2C占12.99%（10/77），3C-4C占57.41%（44/77），≥5C占29.87%（23/77）。c-erbB-2阳性级别与DNA倍体有相关关系（P<0.025），c-erbB-2阳性级别随DNA倍体增高而增高。结论 （1）PCNA表达水平和DNA倍体可作为衡量乳腺癌恶性程度的指标之一。（2）DNA倍体和c-erbB-2表达水平对判断乳腺癌的增殖活性和预后具有一定意义。
关键词 乳腺癌 免疫组化 PCNA c-erbB-2 DNA 图像分析
Correlation between PCNA expression，c-erbB-2
expression and DNA ploid of breast carcinoma
Zhao Huanfen，Huo Junai，Huo Hongchang，et al.
Department of Pathology，People’s Hospital of Hebei Province，Shijiazhuang 050051.
【Abstract】 Objective To investigate the correlation between PCNA expression，c-erbB-2expression and DNA ploid of breast carcinoma.Methods PCNA expression，c-erbB-2expression were determined by immunohisˉtochemical technique in85cases breast carcinoma.DNA ploid of85cases breast carcinoma was performed by Feulgenstain and automatic image analysis technique.Results （1）In85cases breast carcinoma，DNA aneuploid rate was87.06%（74/85），and3C-4C was the most，63.53%（54/85）.DNA aneuploid rate of ductal infiltriting carcinoma was87.88%（58/66），showing significant difference（P<0.005）with the84.12%（16/19）DNA aneuploid rate of all the other type of breast carcinoma.（2）In the79cases of expressing PCNA positive，the rate of2C was12.66%（10/79）;the rate of3C-4C was54.43%（43/79）;and≥5C was32.19%（26/79）.There was correlation between DNA ploid and the level of PCNA positive expression（P<0.005）.（3）In the77cases of expressing c-erbB-2positive，the rate of2C was12.99%（10/77）;the rate of3C-4C was57.14%（44/77）;and≥5C was29.87%（23/77）.The correlation between DNA ploid and the level of c-erbB-2positive expression was found（P<0.025）.Concluˉsion （1）The level of PCNA expression and DNA ploid may serve as an indicator to predict the malignant degree of breast carcinoma.（2）DNA ploid and the level of c-erbB-2expression imply important significance for predicting the proliferation degree and prognosis of breast carcinoma.
Key words breast carcinoma immunohistochemistry PCNA c-erbB-2DNA ploid automatic image analysis
肿瘤细胞DNA非整倍体是恶性肿瘤特征性标志之一。测量和分析细胞核DNA含量与DNA倍体对恶性肿瘤的病理诊断、恶性程度的判断具有重要价值 ［1］ 。不同类型乳腺癌DNA倍体研究时有报道，但有关乳腺癌DNA倍体与PCˉNA、c-erbB-2表达相关性研究国内尚未见报道。本文就这一问题加以探讨。
1 材料与方法
1.1 材料 随机抽取我院1996～1998年间女性乳腺癌标 本存档蜡块85例，均为10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋、切片，厚度为4μm。
1.2 方法
1.2.1 细胞核DNA倍体测定 切片脱蜡至水，应用经典Feulgen染色，采用空航军总医院与北京航空天大学联合研制的CMIAS-真彩色医学图像分析系统测定细胞核DNA倍体。图像显示比例1:1。每例测量无重叠的肿瘤细胞200个，淋巴细胞100个，计算机自动统计分析绘出DNA倍体直方图。根据DNA分布峰值分为整倍体（2C）与非整倍体（3C-4C、5C、>5C） ［1］ 。
1.2.2 免疫组化染色 切片脱蜡至水，采用常规S-P法染色，DAB显色剂显色。用PBS缓冲液代替一抗做空白对照。抗PCNA、抗c-erbB-2抗体及S-P试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。结果判定:PCNA阳性定位于细胞核，c-erbB-2阳性定位于细胞膜。上述部位出现棕黄色颗粒为阳性，出现深棕色颗粒为明显阳性。根据阳性细胞比例和着色程度分为4级:（-）为无阳性细胞;（+）为明显阳性细胞<25%或多数细胞轻度阳性;（++）为阳性细胞占25%～50%;（+++）为阳性细胞>50% ［2］ 。
1.2.3 统计学方法 采用χ 2 检验。
2 结果
85例乳腺癌中DNA非整倍体占87.06%（74/85），其中以3C-4C居多，占63.53%（54/85）。浸润性导管癌DNA非整倍体率为87.88%（58/66）;其它类型癌DNA非整倍体率为84.21%（16/85），二者之间差异有显著性（P<0.05）。见表1。
PCNA阳性表达79例。其中2C占12.66%（10/79），3C-4C占54.43%（43/79），≥5C占32.91%（26/79）。PCNA阳性级别与DNA倍体有相关关系（P<0.001），PCNA阳性级别随DNA倍体增高而增高。见表2。
C-erbB-2阳性表达77例。其中2C占12.99%（10/77），3C-4C占57.14%（44/77），≥5C占29.87%（23/77）。c -erbB-2阳性级别与DNA倍体有相关关系（P<0.025），c-erbB-2阳性级别随DNA倍体增高而增高。见表2。
表1 85例乳腺癌组织学类型与DNA倍体关系 略
表2 PCNA、c-erbB-2阳性级别与DNA倍体关系 略
性级别与DNA倍体有相关关系，P<0.005;c-erbB-2阳性级别与DNA倍体有相关关系，P<0.0253讨论长期以来，肿瘤的病理分级一直是判断其恶性程度和预后的主要指标，但分级诊断常受到较多主观因素的影响，而采用CMIAS-真彩色医学图像分析系统，测定肿瘤细胞DNA含量是一种较客观的判断恶性程度和预后的指标。恶性肿瘤不仅DNA水平有不同程度增高，而且出现多量非整倍体 ［3］ 。有资料表明，恶性肿瘤DNA含量和超二倍体率显著高于相应起源组织和良性肿瘤 ［4］ 。本研究对85例乳腺癌细胞DNA倍体分析显示:DNA非整倍体率为87.06%，其中以3C-4C居多，占63.53%，与文献报道一致 ［3］ 。又发现浸润性导管癌DNA非整倍体率明显高于其它类型乳腺癌DNA非整倍体率（P<0.05），提示浸润性导管癌较其它类型乳腺癌恶性程度高、预后差。
3.1 DNA倍体与PCNA阳性表达的关系 众多研究资料表明，PCNA是一种仅在增殖细胞中合成或表达的核内多肽，其表达或合成与细胞周期有关，主要表达于增殖细胞的S期、G 1 期和G 2 初期，表达强度主要作为各种肿瘤细胞增殖活性和恶性程度的一种指标。本研究显示，PCNA阳性级别与DNA倍体有相关关系（P<0.001），PCNA阳性级别随 DNA倍体增高而增高。因此，我们认为PCNA表达情况和DNA倍体分析可作为衡量乳腺癌恶性程度的指标之一。
3.2 DNA倍体与c-erbB-2阳性表达的关系 应用DNA杂交分析法，发现c-erbB-2只在腺癌中扩增，除了胃癌及卵巢癌以外，c-erbB-2在乳腺癌中的扩增是其它腺癌的3倍 ［5］ 。亦有报道，c-erbB-2编码产物与EGFR极为相似，也可与生长因子结合引起酪氨酸磷酸化，通过细胞内信息传递，活化细胞核内某些基因引起细胞增殖 ［6］ 。本文c-erbB-2阳性表达率为90.59%（77/85），DNA非整倍体率为87.01%，与国内外报道一致 ［3］ 。许多资料表明，c-erbB-2与乳腺癌的预后关系密切。本研究显示，c-erbB-2阳性级别与DNA倍体有相关关系（P<0.025），c-erbB-2阳性级别随DNA倍体增高而增高。提示，DNA倍体分析和c-erbB-2阳性表达对判断乳腺癌的增殖活性和预后具有一定意义。
参考文献
1 Fernando C.Expression of c-erbB-2protein and DNA ploid in breast carcinog enesis.Arch Pathol Lab Med，1995，119:815.
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3 师永红，孙慧宽，李增山.c-erbB-2表达及DNA含量与乳腺癌组织学类型的相关性研究.临床与实验病理学杂志，1998，14:448.
5 Maker AP，Desmedt EJ，Potter CR，et al.Neu（c-erbB-2）oncogene in breast cancer and its Possible association with the risk of distant metasˉtases.Acta On col，1990，29:931.
6 叶锋，黄冰，黄书伟.乳腺肿瘤中c-erbB-2癌基因产物的表达及意义.中华病理学杂志，1993，22:104.
（编辑 秋实）
作者单位:1 050051河北省人民医院病理科
2 河北省石家庄市第六医院外科