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【摘要】 目的 研究乳腺癌组织中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、C-erbB-2及P-gp基因的表达水平、相互关系及其临床意义。方法 乳腺癌组织常规石蜡包埋切片对其ER、PR、C-erbB-2及P-gp进行SP免疫组化法染色。结果 180例乳腺癌ER、PR、C-erbB-2及P-gp表达阳性率分别为51.5%、55.9%、48.2%和44.2%; C-erbB-2及P-gp随着临床分期增加和腋窝淋巴结转移数目的增加,其阳性表达率亦增加,差异有显著性(P＜0.05)。ER、PR阳性表达率则相反,差异无显著性(P＞0.05)。ER、PR阳性表达率与C-erbB-2及P-gp阳性表达呈负相关,差异无显著性(Ｐ>0.05)。结论 C-erbB-2、P-gp是判断乳腺癌预后的有效指标。ER、PR与临床分期、淋巴结转移有一定关系，但不十分明显。
【关键词】 乳腺肿瘤; C-erbB-2基因、P-gp基因; 激素受体; 免疫组织化学
Expression of C-erbB-2、P-gp and the hormone receptor in breast carcinoma and their clincal significanes
LIU Yan-hong，ZHAO Qiang，CAO Juan.
Department of Pathology, The Second Hospital of Traditional Chinese Medicine University, Changsha, Hunan 410005,China
【Abstract】 Objective To study the expression levels of estrogen receptor(ER)、progesterone receptor(PR)、C-erbB-2 and P-gP as well as their correlations and clinical significance in breast cancer tissues.Methods The assays of ER、PR、C-erbB-2 and P-gp were performed by immunohistochemical SP methods on the paraffin routinely embedded sections of specimens with breast cancer. Results The positive expression rates of ER、PR、C-erbB-2 and P-gp were 51.5%、55.9%、48.2 % and 44.2 %, respectively.The positive rates of C-erbB-2 and P-gp increased with the number of metastasis lymph node and clinical stage, and there was a significant correlation(P＜0.05).The positive rates of ER and PR decreased with the number of metastasis lymph node and climcal stage, and there wasn’t significant correlation (P＞0.05). ER and PR had a reverse correlation with the expression of C-erbB-2 and P-gP,but there wasn’t significant difference (P＞0.05). Conclusion These results indicated that C-erbB-2 and P-gP are useful prognostic factors in patients with breast cancer. The expression of ER and PR are associated with the clinical stage and lymph node metastases of breast cancer, although this relation isn’t significant.
【Key words】 breast neoplasms;C-erbB-2 gene、P-gP gene; estrogen receptor、progesterone receptor; immunohistochemistry
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,已居妇女恶性肿瘤死因的首位,其预后的判断及与预后相关的生物学标志物备受关注,一些研究表明,乳腺癌激素受体状态、肿瘤细胞增殖活性的强弱及相关肿瘤基因的表达与乳腺癌的预后关系密切。C-erbB-2及P-gp作为两个独立的预后因子近年来越来越成为研究的重点。本研究对180例乳腺癌标本同时检测C-erbB-2、P-gp、ER和PR的表达,探讨其相互关系及在评估预后和选择治疗方案上的意义。
1 材料与方法
1.1 材料 收集我院及外院2000年3月～2005年10月外科手术切除有完整资料、经病理证实的女性乳癌标本180例,年龄34～84(平均53.5)岁。30岁段占2.2%(4/180);40岁段占32.7%(51/180);50岁段占26.11%(47/180);60岁段占23.1%(42/180);70岁以上占20.0%(36/180)。按照国际抗癌联盟TNM分类分期标准:Ⅰ期29例(16.1%),年龄40～48(平均59.7)岁;Ⅱ期94例(52.2%),年龄34～82(平均57.5)岁;Ⅲ期57例(31.7%),年龄52～78(平均70)岁。按照WHO乳腺恶性肿瘤分类法:浸润性导管癌占84.4%(152/180);黏液性腺癌占4.4%(8/180);髓样癌、导管内癌、腺癌、小叶癌各为2.8%(各5/180)。180例乳癌中166例获得术后随访,随访率92.2%,随访时间为6～40个月。术后2年死亡者2例,分别为临床Ⅱ和Ⅲ期。
1.2 检测方法 C-erbB-2、P-gp、ER、PR及SP试剂盒购自福州迈新生物有限公司。采用免疫组化法,实验步骤按SP试剂盒说明书进行。
1.3 结果判断 根据对乳腺癌的ER及PR等检测的阳性判定标准，ER及PR以细胞核为阳性表达部位, 内有棕色颗粒为阳性表达，阳性范围<30%为低含量(+),31%～50%为中含量(++),>50%为高含量(+++),未见阳性细胞为阴性(--)。C-erbB-2和P-gp阳性表达位于细胞膜及细胞浆,呈棕褐色细颗粒状，阳性细胞数占10%～25%为(+),25%～50%为(++),>50%为(+++),<10%为阴性。对免疫组化染色结果进行统计学分析。癌组织采用Motting-Han分级方法进行组织学分级:(1)根据细胞异型低、中、高分1度、2度、3度;(2)根据腺体形成>75%、<75%及<10%分1度、2度、3度;(3)根据核分裂相平均<1、1～2及>2个/高倍视野(计数10个高倍视野计算平均值)分1度、2度、3度。3项计分总和8度～9度者为Ⅲ级,6度～7度为Ⅱ级,3度～5度为Ⅰ级。
1.4 统计学方法 采用SPSS11.5统计学软件包对资料进行t检验及方差分析。
2 结果
180例病人乳腺癌组织C-erbB-2基因蛋白过度表达率组织学分级G1、G2、G3期分别为17.5%、38.2％、66.1％；P-gp基因蛋白过度表达率组织学分级G1、G2、G3期分别为16.7％、40.2％、60.1％。其中C-erbB-2、P-gp过度表达率与乳腺癌的组织学分级呈相关关系(P＜0.05);恶性程度高、分化差的病理类型如髓样癌、浸润性导管癌C-erbB-2、P-gp过度表达率高(P＜0.01)。见表1。
表1 乳腺癌预后相关因素与C-erbB-2、P-gp过度表达 (略)
在180例乳腺癌患者中，免疫组化阳性表达率C-erbB-2 48.2%(87/180)，P-gp 44.2％（80/180）， ER 51.5%(93/180)，PR 55.9%(101/180)。其阳性表达与临床分期及淋巴结转移的关系见表2。由表2可以得出: C-erbB-2和P-gp的阳性表达率随临床分期及淋巴结转移数目的增加而增加,呈正相关,Ⅰ期与Ⅱ期,Ⅱ期与Ⅲ期的比较,差异有显著性(P＜0.05),无淋巴结转移与淋巴结转移数目≥4个之间比较差异有显著性(P<0.01)。ER、PR的阳性表达率随临床分期和淋巴结转移数目增加而降低, ER在无淋巴结转移与淋巴结转移数目≥4个之间比较差异有显著性(P<0.05),ER、PR与C-erbB-2、P-gp呈负相关,但差异无显著性(P>0.05)。见图1～４。
表2 乳腺癌中C-erbB-2、P-gp、ER和PR的阳性表达与预后关系（略）
3 讨论
C-erbB-2,又称为neu/HER-2,是人类肿瘤中发生改变频率最高的癌基因之一。人C-erbB-2定位于染色体17q21,编码一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白,相对分子量为185kD,又称为p185。目前已公认C-erbB-2与乳腺癌的发生、发展关系密切,约在20%～30%的乳腺癌中可以检测到该基因的扩增和过表达［1,2］。本研究表明,C-erbB-2表达与临床分期及乳腺癌腋窝淋巴结转移有关,C-erbB-2阳性高、临床治疗差及腋窝淋巴结转移率亦高,这与文献报道一致［3］。
P-gp是MDR-1所编码的P-糖蛋白,是一种能量依赖性药物排出泵,当其表达增强时,会导致药物的流出增加,细胞内药物浓度下降,无法构成对肿瘤细胞的有效杀伤,产生P-gp介导的MDR,说明P-gp表达与耐药性和化疗疗效有关。而研究表明［4］,乳腺癌中肿瘤侵犯程度越深、越广泛,P-gp表达阳性越多,淋巴结转移越严重,MDR-1基因阳性表达率越高,可见乳腺癌中P-gp的表达与临床疾病的发展程度也呈正相关。本组资料显示,肿瘤病理组织学类型的差异(导管内癌和黏液腺癌与浸润导管癌之间),淋巴结转移程度的不同，与C-erbB-2和P-gp的表达率密切相关与文献的结论一致。本组资料还显示 C-erbB-2和P-gp作为两个相互独立的预后和治疗相关因子,免疫组化阳性表达具有相同的临床意义。
乳腺还是ER、PR的靶器官,ER、PR是调节性器官细胞生长发育的雌激素和孕激素受体,在正常乳腺上皮细胞的胞核内均含有雌二醇受体和孕激素受体,乳腺癌细胞仍保留对ER、PR的表达。在本组调查中［5］,ER、PR的阳性表达与乳腺癌的组织学类型有关,在浸润性导管癌、髓样癌、腺癌阳性表达低于其他类型。很多研究显示乳腺癌细胞分化程度高,恶性程度低,其ER、PR的阳性表达高,内分泌治疗效果较好,预后较好［6］。在本组的调查中,ER、PR在淋巴结转移组有阳性表达,但略低于淋巴结无转移组,差异无显著性(P＞0.01)。
总之，联合检测C-erbB-2、P-gp、ER和PR对判断乳腺癌的生物学行为与预后，以及选择治疗方案具有重要的指导意义。
(本文图片见封三) （略）
【参考文献】
1 Slamon DJ,Clark GM,Wong SG et al.Human breast cancer correlation of relaspse and survival with amplification of the HER-2/neu oncogene.Science,2002, 235(4785):177-182.
2 Slam on DJ, Godolph in W, Jones LA，et al. Studies of the HER-2/neu proto-oncogene in human breast and ovarian cancer. Science, 2003, 244(4905):707-712.
3 Shou Y,Huyano T,Gong Y,et al.Influence of angiogenetic factors and matrix megaloproteinases upon tumour progression in non-small-cell lung cancer. Br J Cancer,2001,85(11):1706-1712.
4 王振国，陈惠庆.乳腺组织中MDR－1基因检测与临床分析.肿瘤与临床，1999，11（2）：89-90.
5 Vasconcelos A, Medeiros R,Veiga I, et al. Analysis of estrogen receptor polymorphism in codon 325 by PCR-SS-CP in breast cancer: association with lymph node metastasis. Breast J, 2002,8(4):226-229.
6 Horita K, Yamaguchi A, H irose K, et al. Prognostic factors affecting disease-free survival rate following surgical resection of primary breast cancer. Eur J Histochem, 2001,45(1):73-84.
(编辑：守 中)
作者单位：410005 湖南长沙，湖南中医学院附属第二医院病理科
421001 湖南衡阳，南华大学附属第一医院病理科
518028 广东深圳，深圳市儿童医院(通讯作者)