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【摘要】 目的 通过检测各类型胃癌细胞中C-erbB-2基因数量及蛋白表达并探讨其临床意义。方法 应用双色荧光原位杂交和免疫组化技术检测C-erbB-2表达。结果 有C-erbB-2基因扩增和C-erbB-2蛋白过表达两组生存差异有显著意义。结论 采用免疫组化技术检测C-erbB-2基因蛋白可作为胃癌患者预后评估的有效参数。如果要进一步治疗，则最好以双色荧光原位杂交（FISH）检测结果作为治疗依据。
【关键词】 胃癌；C-erbB-2；荧光原位杂交；免疫组化
C-erbB-2也称Her-2/neu，基因编码分子量185ku的蛋白质，能加速细胞运动，促进癌细胞转移。已经证实有C-erbB-2基因扩增的乳腺癌患者约占乳腺癌的25%［1］。手术后易复发，生存期短并对常用的化疗药物不敏感。本项研究的目的是通过双色荧光原位杂交（dual-color fluorescence in situ hybridization，D-FISH）技术和免疫组织化学技术检测各种类型的胃癌细胞中C-erbB-2基因数量及蛋白质表达并探讨其临床意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集我院胃癌患者手术切除标本123例，其中男81例，女42例；年龄35～82岁，平均60岁。其中119例术后接受化疗，96例有生存随访资料，随访时间2～52个月。全部病例按Lauren分类并统计有转移的胃淋巴结数目。
1.2 荧光原位杂交 （1）试剂：购自Vysis公司Path Vysion-HER-2DNA探针试剂盒，其中HER-2spectrum Orange-DNA作为C-erbB-2基因位点标志；CEP17spectrum Green-DNA作为17号染色体着丝粒标志。（2）结果判定方法：100倍显微镜下，计数细胞核不重叠的肿瘤细胞核内绿色及橘红色荧光点数，每片计数60个肿瘤细胞，计算出橘红信号与绿色信号的数量比率均值。
1.3 免疫组织化学 采用SP法，C-erbB-2抗体及SP试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。免疫组织化学操作流程按SP法常规步骤。用PBS替代一抗作为空白对照。
1.4 结果判定标准 胃癌细胞膜有明显棕黄色者为阳性，阳性细胞要求定位好，着色明显高于背景。阳性细胞，30%者定为阳性。
1.5 统计学方法 采用χ2检验，以P＜0.05为差异有显著性。
2 结果
123例胃癌中有82例做了FISH检测，77例有明确的荧光信号。C-erbB-2基因扩增阳性率是20.8%（16/77）。在有生存期随访资料61例中，C-erbB-2基因扩增者的病死率是64.3%（9/14），无C-erbB-2基因扩增者的病死率是29.8%（14/47），P=0.043。有C-erbB-2基因扩增与无C-erbB-2基因扩增两组经检验P＜0.01，两组生存率差异有非常显著性。将23例死亡病例按术后生存期低于12个月（含12个月）和高于12个月分组分析，有C-erbB-2基因扩增者病死率（88.9%）高于无C-erbB-2基因扩散病死率（50.0%），P=0.041。未发现C-erbB-2基因扩散与胃癌组织分型及胃旁淋巴结转移相关。胃癌C-erbB-2蛋白过表达率是25.2%。在有生存期随访材料的94例中，C-erbB-2过表达者的病死率是34.8%（8/23），高于无C-erbB-2过表达患者的29.6%（21/71），P=0.834。将有C-erbB-2表达与无表达两组检验，两组差异无显著性。将29例死亡者按生存期低于12个月（含12个月）和高于12个月分组并分析各组与C-erbB-2过表达的关系，有C-erbB-2过表达者病死率（87.5%）高于无C-erbB-2过表达者（42.9%），P=0.034。肠型胃癌C-erbB-2过表达率最高是34.4%，弥漫性胃癌和混合性胃癌C-erbB-2过表达率分别是11.9%和23.5%（P=0.033），3组间差异有显著性。未发现C-erbB-2过表达与胃旁淋巴结转移相关。FISH和免疫组织化学两种方法所得结果的符合率是85.2%（52/61），不符合率是14.8%（9/61）。
3 讨论
目前发现除了乳腺癌以外，在人类的多种癌（卵巢癌、子宫内膜癌、前列腺癌、胃癌等）中都存在一定比率的C-erbB-2基因扩散。文献报道胃癌中C-erbB-2基因比率是10.1%～19.3%，过表达率是10%～45%［2］。本组研究结果C-erbB-2基因扩增率是20.7%，略高于文献报道的比率，其原因可能与方法学不同有关。我们采用的双色荧光原位杂交技术，较其他研究者［3］采用的Southem blot或短片段的单色荧光探针等方法，灵敏度更高，杂交信号强，有利于提高阳性检出率。本组研究表明，有C-erbB-2基因扩增的胃癌患者病死率（64.3%）明显高于无该基因扩增的胃癌患者（29.8%，P＜0.05）。同样有C-erbB-2基因扩增的胃癌患者的生存率明显低于无该基因扩增的胃癌患者的生存率（P＜0.01）。同时发现，有该基因扩增的胃癌，患者12个月内病死率明显高于无该基因扩增的胃癌患者12个月内病死率。有C-erbB-2蛋白过表达患者的病死率（34.8%）亦高于无C-erbB-2蛋白过表达患者的病死率（29.8%），且前者的生存率亦低于后者。同样，有C-erbB-2蛋白过表达患者12个月内病死率（87.5%）明显高于无C-erbB-2蛋白过表达患者12个月内病死率（42.86%，P=0.034）。因此，我们认为C-erbB-2基因扩增或过表达与胃癌患者的预后有明显关系，特别是有该基因扩增的患者，其术后病死率高、生存期短、预后差。胃癌C-erbB-2基因与胃淋巴结癌转移的关系文献报道的结果不一［4］。有学者报道胃癌C-erbB-2基因扩增或过表达常伴有胃淋巴结癌转移率增高，但亦有相反的报道［5，6］。我们的研究结果显示，胃癌C-erbB-2基因扩增或过表达均不伴有胃周围淋巴结转移率提高。我们研究结果还显示C-erbB-2基因在肠型胃癌中扩增率和过表达率均高于弥漫型和混合型胃癌。目前检测C-erbB-2基因主要有两种方法：一是荧光原位杂交测定该基因的扩增与否，另一是免疫组织化学以半定量方式来评估该基因蛋白过表达水平。荧光原位杂交目前多采用双色荧光原位杂交技术，故可对C-erbB-2基因做定量分析。因此，我们认为双色FISH技术检测C-erbB-2基因扩增信号清晰、结果准确性高、可靠性强。采用免疫组化技术检测C-erbB-2基因蛋白过表达可作为胃癌患者预后评估的有效参数，如果要进一步开展针对C-erbB-2基因的治疗措施，则最好以FISH检验结果（有否C-erbB-2基因扩增）作为治疗依据。
【参考文献】
1 Pegran MD，Pauietti C，Samo DJ.HER-2/neu as a predictive marker of response to breast cancer therapy.Breast Cancer Res Treat，1998，52：65-77.
2 张杰，陈乐真，吕亚莉，等.HER-2/neu基因扩增及其蛋白表达与乳腺癌分化及转移的关系.中华病理学杂志，1997，26：46-47.
3 Oi A，Kobayashi M，Mai M，et al.Amplification of c-erbB-2 in gas tric cancer：detection in fromalin-fixed，oaraffin-embeddcd tissue by fluorescence in situ hybeid-ation.Lablnvest，1998，78：345-351.
4 Ishimawa T，Kobayashi M，Mai M，et al.Amplification of c-erbB-2 (HER-2/neu) gene in gastric cancer cells.Detecion by fluoresce in situ hybridization.Amjpathol，1997，151：761-768.
5 Duesun A，Povraz A，Celik B，et al.Expression of c-erbB-2 oncoprote in ingastric carcinoma：correlation with histopathologic characteristica and analysis of Ki-67.Pathol Oncul Res，1999，5：104-106.
6 Shun CT，Wu MS，Lin JT，et al.Relationship of p53 and c-erbB-2 expression to histopathologieal features，helicobacter pyiori infection and prognosisin gastric cancer.Hepato Gastroenterology，1997，44：604-609.
作者单位： 150010 黑龙江哈尔滨，哈尔滨市第一医院
(编辑：宋 青)