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摘要：目的研究流行性出血热(EHF)肾组织中增殖细胞核抗原(PCNA)和波形丝蛋白(vimentin)的 表达及意义。方法 应用多重PAP免疫组化方法，对17例EHF尸检肾组织中PCNA和vimentin的表达进行观察。 结果 EHF尸检肾组织PCNA的阳性率为64.71％ ，集合管的增殖指数显著大于远曲小管(P∨ 0.01)， 低血压休克期患者远曲小管和集合管上皮细胞vimentin呈强阳性表达，相同部位 PCNA也呈阳性，PCNA的阳性强度与局部病变的程度相一致。 结论 EHF患者急性肾功能衰竭的早 就存在损伤肾小管上皮细胞的再生、增殖和分化,这些变化在EHF肾损伤的修复反应中具有重要的 意义。
中图号：R512.8 文献标识码：A 文章编号：1007-8738(2000)03-022803
Expression and significance of proliferating cell nuclear antigen and vimentin in renal tissue from the patients with epidemic hemorrhagic fever
CHEN Wei XU Yue-qing LI Yuan-xun
（Department of Nephrology, Xijing Hospital，Fourth Military Medical University, Xi'an 710032， Shaanxi Province， China）
YANG Shou-jing LIU Yan-fang
（Department of pathology,Fourth Military Medical University, Xi'an 710032， Shaanxi Province， China）
Abstract: Aim To study expression and significance of proliferating cell nuclear antigen(PCNA) and vimentin in renal tissues of the patients with epidemic hemorrhagic fever(EHF). Methods 17 autopsy renal tissues from the patients died of EHF were examined by immunohistochemical staining(PAP). Results The results showed that positive rate of PCNA expression in 17 autopsy renal tissues was 64.71％ ; proliferative index of collecting tubes was significantly higher than that of distal convoluted tubules(P∨ 0.001); Vimentin expression of epithelial cells in distal convoluted tubules and collecting tubules from the EHF patients at hypotensive shock stage were strongly positive,PCNA expression at the same position was also positive,and positive intensity of the PCNA expression was consistent with severity of local lesions. Conclusion There are regeneration,proliferation and differentiation of injured renal tubular epithelial cells at early stage of the EHF patients with acute renal failure. These changes of the renal tubular epithelial cells are of great significance during restoration of injured kidneys.
Keywords: epidemic hemorrhagic fever； kidney； proliferating cell nuclear antigen； vimentin； immunohistochemistry▲
流行性出血热(EHF)累及肾脏时，可表现为不同程度的急性肾功能衰竭(ARF)。组织形态学及免疫组化研究表明，EHF肾损伤除肾髓质出血外，主要表现为肾小管不同程度的变性、坏死和细胞骨架改变〔1，2〕。目前认为，病毒的直接作用、免疫因素和炎性介质的参与，以及低血压休克共同作用所致肾小管上皮细胞损伤是ARF的主要原因，但对肾脏损伤后的修复过程却了解甚少。我们以抗增殖细胞核抗原(PCNA)和抗波形丝蛋白(vimentin)的单克隆抗体(mAb)，检查了受损伤的肾组织中肾小管上皮细胞的增殖和分化，并探讨了肾小管上皮细胞的再生在肾损伤后修复过程中的作用。
1 材料和方法
1.1材料肾组织标本取自17例EHF患者尸检肾脏(由上海医科大学病理学教研室提供)，其中男14例，女3例，年龄20～58岁。临床分期：低血压休克期5例、少尿期11例、恢复期1例。所有病例既往均无急、慢性肾脏病病史，但均有不同程度的ARF，死后经组织病理学和检测病毒抗原而确诊。正常对照组(5例)的标本取自肾良性肿瘤旁的组织，经HE染色后光镜观察，肾组织的形态结构基本正常。上述组织经100mL/L福尔马林固定、石蜡包埋，制成连续性切片(5μm)后待检。免疫组化中所用一抗为抗PCNA(PC10，1∶100，DaKo公司产品)的mAb和抗波形丝蛋白(vimintinV9，1∶200，DaKo公司产品)的mAb。
1.2方法
1.2.1EHF肾组织的免疫组化染色采用多重PAP染色法〔3〕。主要步骤：组织切片脱蜡至水，以甲醇(800mL/L)H2O2(3.3mL/L)处理40min，灭活内源性过氧化物酶后，再以20mL/L正常羊血清37℃封闭1h。然后依次加抗PCNAmAb(1∶100)或抗vimentinmAb(1∶200，4℃孵育72h),羊抗鼠IgG(1∶300，本室制备)及鼠PAP(1∶10000，武汉生物制品所)进行多重PAP染色。实验中以正常肾组织替代EHF患者的肾组织，以无关mAb或PBS替代一抗及同一组织片作为自身对照。
1.2.2PCNA＋细胞核的定量采用了以下几个指标：①每个肾小球中PCNA的相对均值为所有肾小球中PCNA＋细胞总数除以肾小球个数。②分别计数肾小管不同部位PCNA＋的细胞，并随机计数10个高倍视野中PCNA＋的肾小管上皮细胞数。③增殖指数(PI)为平均每个高倍视野中PCNA＋的细胞数。所获结果以━±s表示，组间均数的差异采用t检验。
2 结果
2.1EHF肾组织中PCNA的表达17例EHF患者的肾脏中,有11例PCNA呈阳性(64.71％)。各节段肾小管的PI值不尽相同(3.13～22.99)。PCNA＋细胞主要分布于远曲小管和集合管,但集合管的PI值显著大于远曲小管(P∨0.01)。肾皮质远曲小管也有不同程度的PCNA表达，定位于细胞核(图1)。肾小球中PCNA的相对平均值为1.63，与正常对照组无显著差异(P∧0.05)。PCNA＋细胞不仅见于形态正常的肾小管，也见于“增生的集合管”(7/11例)。其中6例在PCNA表达的部位伴有不同程度的肾小管损伤、出血等病变。另外，部分病例的血管内皮细胞(2/17)和间质中，浸润的炎细胞PCNA的表达呈阳性。在低血压休克期患者的肾脏中，可检出PCNA的表达(4/5例)，少尿期PCNA＋细胞数增多,但无统计学意义(P∧0.05)。10例正常对照组的肾组织仅1例PCNA呈阳性，且PCNA＋细胞数极少。