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支原体是一群介于细菌与病毒之间的原核生物，是引起非淋菌性泌尿生殖道炎症的重要病原体，而解脲支原体（Uu）是主要的病原体之一。国内外学者曾报道Uu感染可导致女性不孕不育 ［1］ 。我们应用液体培养法与荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法同时检测不孕不育妇女的宫颈拭子的Uu，比较他们的结果及2种检测方法的优缺点。
1 资料与方法
1.1 研究对象 来我院辅助生育中心就诊的不孕不育妇女85例。
1.2 试剂和仪器 支原体培养试剂由珠海浪峰生物有限公司生产;而FQ-PCR试剂盒由中山医科大学达安基因诊断中心生产。仪器:培养箱，加样器，PE7700看动荧光PCR仪（ABI Prism7700Sequence Detector美国Perkin Elmer公司产品）。
1.3 标本采集方法 用无菌棉拭子插入宫颈1～1.5cm取分泌物标本2份;1份放入支原本培养的液体培养基中，而另1份放入生理盐水中做PCR检测Uu。
1.4 实验方法
1.4.1 支原体液体培养法 在第一排的第一孔加入100μl不含标本的液体培养基作为阴性对照，而其他孔则加入100μl含标本的培养液，再加2滴石蜡油，盖上盖子放入温箱中培养24～48h，24h观察Uu结果，48h观察Mh结果。反应孔（Uu≥10 4 或Mh≥10 4 ）呈桔黄色或红色为阳性。
1.4.2 FQ-PCR法 将标本洗涤液12000rpm离心5min，弃去上清液，采用常规碱裂解法提取Uu-DNA，加样后将各反应管放入PE7700自动荧光检测仪，按下列条件扩增:93℃2min预变性，然后按93℃45s或55℃120s共做40个循环，反应结束后，由电脑自动分析计算出定量结果。每批FQ-PCR-Uu试剂盒均做定量阳性标准曲线，每次检测均做阳性和阴性对照。
2 结果
对85例宫颈拭子中Uu的检出结果，培养法阳性58例，阳性率为68.24‰;FQ-PCR法阳性55例，阳性率为64.71‰。用SPSS统计分析软件进行分析，用配对计数资料的χ 2 检验结果表明:P=0.754，差异无显著性（P>0.05），也就是说培养法与FQ-PCR法在检测生殖道Uu时，结果差异无显著性，结果见表1。2种方法的检测结果不完全相同，如培养法阳性的58例中有49例FQ-PCR结果为阳性，9例为阴性。Uu培养阴性的27例中有6例FQ-PCR结果为阳性。符合率为82.35‰。表1 2种方法检测Uu的结果 （略）
3 讨论
实验结果表明2种检测方法其阳性率差异无显著性。两种方法者可以满足临床的需要。2种方法之间各有其优缺点。液体培养法是根据Uu含有脲酶 ［2］ ，可分解培养基中的尿素，使pH升高，致使酚红指示剂由淡黄色变为桃红色或紫红色。它具有操作简单，不需要特殊的仪器或设备，可同时检测Uu和Mh2种支原体，而且可同时做药敏试验，给临床提供用药参考依据，适用于基层医院开展支原体的检测。但由于女性生殖道内杂菌较多 3］，当标本中杂菌的量超过培养基中加入的抗生素的抑菌能力时，可导致培养基pH值改变，使指示剂显色出现假阳性结果。FQ-PCR技术是国内外近年发展起来的新的核酸检测技术 ［4，5］ ，它在常规PCR基础上，加入了一条荧光基因标记的特殊探针。荧光信号强度伴随着PCR产物的增长而增长，根据这原理，在PCR过程中连续不断地检测反应体系中荧光信号的变化，待反应结束后，自动计算出起始DNA的拷贝数。该技术从根本上解决了常规PCR不能定量的问题，可以做多种技原体的检测，具有快速、特异性、灵敏度高等特点。但它需要特殊的仪器与设备，且仪器价格昂贵，实验室的条件要达到较高标准，一旦控制不好也会有假阳性或假阴性疗效的依据。总之，2种方法都是检测Uu的有效方法，各有利弊，使用时应根据具体实际情况加以选择。
参考文献
1 任平，章晓梅，朱瑛，等.孕早期CT、Uu感染对流产的临床细胞诊治研究.中国优生与遗传杂志，1999，7（4）:69.
2 StylerM，Shapiro SS.Mouicutes（mycoplasma）infertility.Fettil steril，1985，44:1.
3 鄂征.组织培养技术，北京:人民卫生出版社，1982，188.
4 Gibson EM，Heid CA，Williams PM.A noved method for real time quanˉtiative RT-PCR.Genome Res，1996，6:995-1001.
5 Heid CA，Steuens J，Livak KJ，et al.Real time quantitative PCR.Genoml Res，1996，6:986-994.
6 刘颖，邹先进，蔡兰，等.荧光定量聚合酶链反应检测解脲支原 体感染的临床意义.中国优生与遗传杂志，2003，11（4）:23-24.
作者单位:528300广东省佛山市顺德人民医院检验科