TCJ的安全性及抗氧化作用

　　【摘要】 目的  探讨TCJ的急性毒性、致突变性及抗氧化作用。 方法  安全性试验按《食品安全性评价程序和方法》进行;抗氧化试验用20月龄大鼠作为衰老模型，分老年对照组、低剂量试验组、中剂量试验组和高剂量试验组，另设1个青年对照组（3月龄大鼠），实验组分别给予27、135、675mg/（kg·bw）的TCJ，老年对照组和青年对照组同时给予蒸馏水，连续2个月。实验期满后，股静脉杀鼠取血、制备10%肝匀浆，测定血清中超氧化歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）含量和肝组织中丙二醛（MDA）含量。 结果  TCJ无毒、无致突变性，可降低自然衰老模型大鼠肝组织中MDA含量、升高血清中SOD活性和GSH-Px含量。 结论  TCJ安全无毒，有抗氧化作用。

　　        
　　甜菜碱是一种水溶性季氨盐，是最有效的甲基供体，其甲基化作用有延缓衰老、防治肝损伤、抗应激、提高免疫力等功效。TCJ是以甜菜碱为功效成分的一种保健食品，本实验室对其进行了急性毒性、致突变性及抗氧化试验研究。

　　1 材料与方法
    
　　1.1 药品与试剂 TCJ，白色片剂，人体日摄入量为0.027g（kg·bw）。SOD试剂盒、GSH-Px试剂盒、MDA试剂盒（试剂盒均由南京建成生物工程研究所生产）。

    　1.2 实验动物 昆明种小白鼠;雌性wistar大白鼠18月龄鼠40只，购入后在本实验室饲养2个月，体重306.8～409.5g，3月龄鼠10只，体重145.3～201.5g，均由中国医科大学提供。

    　1.3 仪器 722分光光度计、匀浆机、离心机等。

    　1.4 方法 安全性试验按《食品安全性评价程序和方法》进行;抗氧化试验用自然衰老模型。

    　1.4.1 小鼠急性毒性试验 采用霍恩氏法进行试验。小鼠体重为18.0～21.7g。每个性别小鼠随机分成21.50、10.00、4.64、2.15g/（kg·bw）4个剂量组，各剂量组蒸馏水配制。小鼠灌胃后连续观察14天。

   　 1.4.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 采用间隔24h经口灌胃法进行试验，小鼠体重25.1～28.7g，按体重随机分组，每组10只，雌雄各半。受试物剂量为0.94、1.88、3.75、7.50g/（kg·bw），环磷酰胺［40mg/（kg·bw）］为阴性对照，蒸馏水为阴性对照。每只动物计数1000个嗜多染红细胞（PCE）的微核发生率（千分率）。

    　1.4.3 小鼠精子畸形试验 用体重30.0～35.0g的性成熟雄性小鼠，按体重随机分组。受试物剂量1.88、3.75、7.50g/（kg·bw）。环磷酰胺［400mg/（kg·bw）］为阳性对照，蒸馏水为阴性对照。每组5只动物，每只动物计数1000个结构完整的精子，计算畸变精子发生率。

    　1.4.4 Ames试验 采用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四个试验菌株进行试验。采用多氯联苯（PCE）诱导的大鼠肝匀浆作为体外代谢活化系统。试验设0.313、0.625、1.250、2.500、5.000mg/皿5个剂量，同时设空白对照、阴性对照（蒸馏水）和阳性对照（非活化系统TA97、TA98、TA102为敌克松50.0μg/皿，TA100为叠氮钠1.5μg/皿。活化系统采用二氨基芴10.0μg/皿）。每个剂量做3个平行。整套试验在相同条件下重复做两次并分别统计。

    　1.4.5 抗氧化功能实验 根据体重将老龄鼠随机分为4组，即老年对照组、低剂量试验组、中剂量试验组和高剂量试验组，另设1个青年对照组。各试验组连续给药（对照组给蒸馏水）2个月后，股静脉杀鼠取血、制备肝匀浆，测定血清SOD、GSH-Px、肝组织MDA值。

   　 1.5 实验数据统计 抗氧化实验数据统计均采用SPSS统计软件进行方差分析。

　　2 结果
    
　　2.1 小鼠急性毒性试验 灌胃后，21.5g/（kg·bw）剂量组动物出现呆卧少动、步态蹒跚等症状，雄性动物死亡3只，雌性动物死亡1只，根据结果判断，该受试物小鼠急性毒性LD 50 >15g/（kg·bw），为无毒级。

 　   2.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 经卡方检验，各剂量组微核率与阴性对照组比较差异无显著性（P>0.05），阳性对照组与阴性对照组比较差异有非常显著性（P<0.01）。该受试物小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验为阴性。

　　2.3 小鼠精子畸形试验 经Wilconson秩和检验，各剂量组精子畸形率与阴性对照组比较差异无显著性（P>0.05），阳性对照组与阴性对照组比较差异有非常显著性（P<0.01）。小鼠精子畸形试验为阴性。

   　 2.4 Ames试验 各剂量组回变菌落数均未超过阴性对照组回变菌落数的2倍，亦无剂量-反应关系。说明该受试物对鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四菌株，加与不加S9，均未呈现遗传毒性。

    　2.5 抗氧化功能试验 肝组织MDA和血清SOD和GSH-Px水平见表1，自然衰老大鼠模型肝组织MDA含量明显升高（P<0.01），而血清SOD、GSH-Px的活性明显降低，TCJ可使衰老模型大鼠肝组织MDA含量明显降低（P<0.05），血清SOD、GSH-Px的活性明显升高（P<0.05）。

　　表1 TCJ对肝组织MDA血清SOD和GSH-Px的影响 （略）

　　3 讨论
    
　　TCJ主要成分是甜菜碱，甜菜碱的抗衰老作用是通过“甲基化作用”来实现的，甜菜碱的1个甲基可使高半胱氨酸甲基化，形成内源蛋氨酸和二甲基苷氨酸，内源蛋氨酸形成S-腺苷蛋氨酸并释放甲基，二甲基苷氨酸通过释放甲基形成5-甲基四氢叶酸，5-甲基四氢叶酸是高半胱氨酸合成蛋氨酸的甲基供体。甲基化生成的S-腺苷蛋氨酸（SAMe），具有良好的抗衰老作用，而甜菜碱———高半胱氨酸甲基转移反应可以降低体内危险因子———高胱氨酸的水平，可保护DNA，延缓细胞衰老。本试验结果表明，TCJ安全无毒，有抗氧化作用。    

　　作者单位:130061吉林省卫生监测检测检验中心