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1 材料和方法
1.1 试剂 MASPAT（单克隆抗体固相血小板抗体实验）试剂盒购自荷兰Sanquin公司。
1.2 仪器 KA2200型离心机，5800型板式离心机（KUBO-TA，日本）。
1.3 研究对象 患者标本68份为医院血液科3次以上输血病人血液标本，正常对照20份为正常健康献血员。
1.4 方法
1.4.1 标本制备 实验中所需血小板悬液用本单位献血员机采血小板，经TEN洗涤2次后稀释备用;患者标本及对照标本分离取血浆。
1.4.2 MASPAT法检测 调整血小板悬液为不低于0.14×10 8 ，向微孔中加入50μl血小板悬液，1000rpm离心5min，用PBS洗涤3～6次，每次洗涤时旋转并轻摇微孔板，然后加入2滴LISS试剂，再加入50μl被检血浆，轻摇10s，37℃孵育30min，用PBS洗涤6次，立即加50μl MASPAT抗人IgG，并加入1滴指示细胞，轻轻震荡，1000rpm离心5min看结果。如果指示红细胞聚集在微孔中部，表示阴性结果，如果指示红细胞结合到血小板层上，表示阳性结果。
2 结果
实验中阴性、阳性对照均符合试剂盒规定要求，正常对照组样本均为阴性，样本组中检测到的抗体阳性率为5.88%，两组结果差异有显著性。
3 讨论
国内外对血小板输注无效的预防、处理、抗体实验评估及应用有相当多的讨论，一致认为血小板抗体检测方法中FCM法较好，其次为ELISA法等 ［1］ ，但FCM法仪器要求高，费用昂贵。而MASPAT法检测结果与ELISA法相似，但实验时间短，结果判读容易，重复性较好，所用仪器要求也不高，实验试剂成本较低。欧美等国科学家已根据血小板抗体的特性归纳了血小板抗体检测及输注的方法 ［2，3］ ，Levin等建立了一套血小板输注程序 ［4］ 。在多次输血的慢性血小板减少患者中，30%～70%出现RPT和血小板输血紫癜（PTP） ［5］ 。因此，当出现血小板输注无效时，除应判断是否存在非免疫性血小板消耗的病因外，尚应及时检测HLA和HPA抗体。MASPAT法与ELISA法的原理相似，只是两者所采用的指示形式不同，而灵敏性可与流式细胞仪检测技术相媲美。考虑到临床检测所需的经济、方便、及时及灵敏性的要求，综合各个方面因素，笔者认为MASPAT法较可靠实用。
参考文献
1 韩悦，王兆，朱明清，等.血小板自身抗体的流式细胞仪检测与意义.临床血液学杂志，2000，13（5）:222.
2 Schiffer CA.Diagnosis and management of refractoriness to platelet transfusion.Blood Rev，2001，15（4）:175.
3 Petz LD，Garratty G，Calhoun L，et al.Selecting donors of platelets for refractory patient the basis of HLA antibody specificity.Transfusion，2000，40（12）:1446.
4 Levin MD，Kappers-Klunne M，Sintnicolaas K，et al.The value of al-loantibody detection in predicting response to HLA-matched platelet transfusions.Br J Haemoatol，2004，124（2）:244.
5 Benson K，Fields K，Hiemenz J，et al.The platelet-refractory bone marrow transplant patient:prophylaxis and treatment of bleeding.Semin Oncol，1993，20:102.
作者单位:215006苏州大学医学生物技术研究所
苏州市红十字中心血站
苏州大学附属第一医院