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1 材料与方法
1.1 试剂盒 使用由中国预防医学科学院寄生虫病研究所提供的批号为200101和200305的快速ELISA试剂盒。
1.2 血清 2000年收集的湖北省急性血吸虫病患者血清15份(以下简称急血),慢性血吸虫病患者血清40份(以下简称慢血),共55份。
1.3 仪器 格兰仕WP700L17,系顺德格兰仕电器有限公司产品。
1.4 方法 实验时,将1∶50稀释的被检血清100μl滴入快速ELISA试剂盒抗原板小孔,将家用微波炉接通电源,按袁红等 [2] 采用解冻功率340W,辐射60s。取出后,倾去反应液,用自来水连续冲洗3次,拍干,滴入羊抗人IgG100μl,同上辐射时间和功率。取出后,同上倾去反应液,用自来水连续冲洗5次,拍干,加显色剂2滴,观察反应。每张抗原板设阳性及阴性标准血清对照。
1.5 统计学处理 卡方检验、轶和检验。
2 结果
2.1 微波ELISA与快速ELISA的比较 采用批号为200101的快速ELISA试剂盒,用批号为200305的快速ELISA试剂盒作为对照组,酶结合物以1∶1000、1∶500为两个实验稀释度,分别以各自批号的显色剂进行显色,对实验结果进行比较。阳性例数见表1。
表1 两个批号试剂盒阳性率的比较(略)
结果表明,当酶结合物为1∶500和1∶1000时,200101试剂盒的特异性和敏感性与200305试剂盒差异无显著性。
2.2 采用批号为200305的快速ELISA试剂盒中的阳性参考和阴性参考在1∶1000酶结合物条件下的显色为对照组,对显色程度进行进一步观察比较。颜色与对照组阳性参考相同的记为(+),颜色深于对照组阳性参考的视颜色深浅分别记为(++)、(+++)、(++++),颜色与对照组阴性参考相同或浅于阴性参考的记为(-)。实验结果见表2。
表2 两个试剂盒阳性反应强度的比较 (略)
结果表明,当以同一阳性参考和阴性参考为对照时,200101试剂盒与200305试剂盒阳性反应强度差异有高度显著性。
3 讨论
上述结果表明,200101与200305的两个批号的试剂盒对实验结果差异显著性,按中国预防医学科学院寄生虫病研究所提供的ELISA试剂盒说明,在未开封的情况下置于4℃冰箱保存,有效期为1年,但当改变试剂保存条件,把抗原反应板、酶结合物、阳性参考和阴性参考存放于-25℃冰箱,结果说明低温(-25℃)至2年仍有良好效果,显色剂存放于4℃冰箱仍能有效显色,对于试剂盒的保存有一定的意义,可适合于血吸虫患者少的地区的使用。同样以200305批号,酶结合物1∶500的阳性参考和阴性参考作为参照。200305试剂盒比200101批号的试剂盒显色明显偏深,两个批号试剂盒反应强度差异有非常显著性。当酶结合物的浓度1∶500时,比1∶1000的显色也较深。笔者认为,对于保存期大于1年的快速ELISA试剂盒,建议酶结合物浓度以1∶500为宜。
【参考文献】
1 顾启章,张宏莹,朱善济,等.微波辐射ELISA诊断日本血吸虫病的初步研究.中国寄生虫学与寄生虫病杂志,1999,17:115-116.
2 袁红,张宏莹,杨艳宏,等.家用微波ELISA检测血吸虫病血清抗体的观察.浙江预防医学,2002,14:77-78.
3 严自助,王文,吕再婴,等.血吸虫病抗体的快速测定.中国寄生虫学与寄生虫病杂志,1996,14:302.
作者单位:310012浙江杭州,杭州师范学院医学院