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【摘要】 目的 建立骨筋丸胶囊的质量标准。 方法 TLC:采用薄层色谱法对骨筋丸胶囊中的三七、血竭、秦艽进行了定性鉴别。HPLC:采用高效液相色谱法对骨筋丸胶囊中的蛇床子素进行定量检测。色谱柱:Sinochrom ODS-BP（5μm:4.6mm×250mm）;流动相:甲醇∶水（75∶25），流速0.8ml/min，检测波长322nm。 结果 TLC:各薄层色谱中的斑点清晰，均能得到很好的分离。HPLC:蛇床子素在8.1～40.4μg/ml范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为97.97%，RSD=2.33%.结论:该方法可准确可靠地对骨筋丸胶囊进行定性、定量检测，能有效地控制制剂的质量。
【关键词】 骨筋丸胶囊;三七;血竭;秦艽;蛇床子素;高效液相色谱;薄层色谱
Study on quality specification of gujinwan capsules
ZHOU Xin，ZHAO Zheng-bao，WENHong-ping，et al.
Department of Pathophysiology，Shanxi Medical Univer-sity，Taiyuan030001，China
【Abstract】 Objective To establish the quality standard of Gujinwan capsules.Methods TLC:The TLC-quali-tative analysis was used to identify Panax notoginseng、Sanguis draxonis、Radix gentianae macrophyllae in Gujinwan capsules.HPLC:The HPLC-quantitative analysis was carried out on a column of Sinochrom ODS-BP（5μm:4.6mm×250mm）using a mobile phase of methanol-water（75:25）with a flow rate of0.8mL/min，the wavelength of detector was327nm.Results TLC:The spots of the three components in Gujinwan capsules were of clearness and good separation.HPLC:The linear range of Osthole was8.1μg/mL～40.4μg/mL（r=0.9999）.The average recov-ery was97.97%（RSD=2.33%）.Conclusions A simple and feasible way was set up to control the quality of Gu-jinwan capsules.
【Key words】 gujinwan capsules;panax notoginseng;sanguis draxonis;radix gentianae macrophyllae;osthole;HPLC;TLC
骨筋丸胶囊是由独活、秦艽、白芍、桂枝、马钱子等十四味中药组成，功效为活血化瘀，舒筋通络，祛风止痛。临床上用于治疗肥大性脊椎炎、颈椎病、跟骨刺，增生性关节炎、大骨节病等。在骨筋丸胶囊中独活是君药，其主要有效成分为独活内酯、香柠檬内酯、蛇床子素等 ［1］ ，本实验采用高效液相色谱法对该制剂中的独活进行了定量检测，有关独活的测定一般采用气相色谱法 ［2］ 、薄层色谱扫描法 ［3］ 等检测蛇床子素的含量，应用气相色谱法时蛇床子素易分解，薄层色谱扫描法则重现性较差，这两种方法引起的误差均比较大，故本实验采用HPLC法测定制剂中蛇床子素的含量。为进一步控制本品的内在质量，本实验还建立了薄层色谱法对骨筋丸胶囊中的三七、血竭和秦艽进行了定性鉴别。本实验建立的TLC定性鉴别与HPLC定量检测结果满意，为骨筋丸胶囊的质量控制提供了一定的依据。
1 仪器与试药
岛津LC-10AD高效液相色谱仪;SPD-10A紫外检测器（浙江大学色谱工作站）;1901型紫外可见分光光度计（北京普析通用有限公司）。甲醇（北京化工厂），其他试剂均为分析纯。蛇床子素对照品（购于中国药品生物制品检定所，批号:110822-200305）;骨筋丸胶囊供试品（山西华康药业股份有限公司提供，批号:20031014，20031015，20031016）;药材（山西华康药业股份有限公司提供）。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱鉴别
2.1.1 三七的薄层鉴别 取骨筋丸胶囊供试品细粉1.5g，加水约5滴，搅匀，再加以水饱和的正丁醇5ml，密塞，振摇10min，放置2h，离心，取上清液，加3倍量以正丁醇饱和的水溶液，摇匀，放置使分层（必要时离心），取正丁醇层，置蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇1ml溶解。另取三七对照药材0.5g，同法制成三七对照药材溶液。按照薄层色谱法 ［4］ ，吸取上述溶液各20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（15:40:22:10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸溶液（1→10），于105℃加热至薄板显清晰斑点。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，置紫外光灯（365nm）下检视，显相同的荧光斑点;而阴性供试品没有相应的斑点。结果见图1。
2.1.2 血竭的薄层鉴别 取供试品0.8g，加乙醚10ml，密塞，振摇10min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取血竭对照药材0.1g，加乙醚10ml，同法制成对照药材溶液。按照薄层色谱法，吸取上述溶液各20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇（19:1）为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性供试品没有相应的斑点。结果见图2。2.1.3 秦艽的薄层鉴别 取供试品2.5g，加氯仿15ml，加热回流30min，过滤，滤液作为供试品溶液。另取秦艽对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。按照薄层色谱法，吸取上述溶液各20μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-环己烷（10:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性供试品没有相应的斑点。结果见图3。
2.2 独活中蛇床子素的含量测定
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取蛇床子素对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含32μg蛇床子素的溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品20粒，精密称定，研细，精密称取细粉2g，置具塞锥形瓶中，精确加入甲醇20ml，称定重量，室温放置4h，超声处理20min，再称重，并用甲醇补足减失的重量，滤过，精密取滤液2ml，置10ml棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 检测波长的选择 在200～400nm波长范围内进行紫外扫描，结果见图4。发现蛇床子素在209、322nm波长处均有强吸收，考虑到209nm波长过短，若在此波长下测定蛇床子素的含量则干扰因素较多，故选择322nm波长作为蛇床子素的检测波长。
2.2.4 色谱条件 色谱柱:Sinochrom ODS-BP（5μm:4.6mm×250mm）（大连依利特公司）;流动相:甲醇∶水（75:25）;流速:0.8ml/min;检测波长:322nm;柱温:40℃。实验表明:在此条件下，基线得以分离，未见明显干扰，蛇床子素（保留时间13.1min）与其它组分分离良好，结果见图5和图6;而不含独活的骨筋丸胶囊阴性供试品图7则无蛇床子素的吸收峰出现。
2.2.5 线性范围的考察 取蛇床子素对照品约10mg，精密称定，置25ml棕色容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，精密吸取该溶液1、2、3、4、5ml，分别置于50ml棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。在上述色谱条件下分别进样20μl。以峰面积（Y）为纵坐标，浓度（X，μg/ml）为横坐标，绘制标准曲线。回归方程为:Y=-5028.4+57543.9X（r=0.9999），结果表明蛇床子素在8.1～40.4μg/ml范围内具有良好的线性关系。
2.2.6 精密度试验 精密吸取蛇床子素对照品溶液20μl，在上述色谱条件下重复进样5次，测定峰面积值，计算得RSD=0.24%，结果表明该方法的精密度良好。
2.2.7 重现性试验 精密称取批号为20031014的供试品，平行制备5份供试品溶液，分别进样20μl，测定峰面积值，计算得RSD=3.56%，结果表明该方法的重现性良好。
2.2.8 稳定性试验 取供试品溶液，分别于0h、6h、12h及24h各进样20μl，测得峰面积值的RSD为2.60%，结果表明在此试验条件下，样品在24h内稳定性良好。
2.2.9 回收率试验 取3份批号为20031014的样品适量，精密称定，加入一定量对照品，按供试品溶液制备项下操作，按含量测定方法测定蛇床子素的含量，计算回收量，并以下列公式计算回收率，结果见表1。
回收率（%）=［（测得量-制剂含量）/添加对照品量］×100%
表1 回收率测定结果（略）
2.2.10 样品含量的测定 取3个批号的样品，每个批号的 样品均取3份，按供试品溶液项下操作，结果见表2。
表2 3批样品含量测定结果（略）
3 讨论
在含量测定中，本实验以甲醇为溶剂，按2.2.2供试品溶液制备项下操作，“称定重量”后，曾分别以立即超声处理20min，放置4h后超声处理20min，放置8h后超声处理20min的方法对各供试品中的蛇床子素进行提取。结果表明放置4h后再超声处理20min的效果较好，故为供试品的提取方法。
蛇床子素为独活中香豆素类成分，其分子结构8位有较大的不饱和侧链，易被氧化破坏，因此在具体操作中应注意避光、低温操作，尽快处理样品。
本实验采用薄层色谱法对骨筋丸胶囊中的三味药材进行了定性鉴别，实验结果表明，本方法分离效果满意，重现性好，专属性强，阴性无干扰;采用高效液相色谱法测定了骨筋丸胶囊中独活的蛇床子素含量，该法快速准确、方便可行，为骨筋丸胶囊的质量控制提供了良好的方法。 （本文图片见附页1）
【参考文献】
1 李力，丁刚.HPLC法测定风湿液中蛇床子素的含量.华西药学杂志，2000，15（3）:203-204.
2 岑路，李书渊.GS法测定乌蛇止痒丸中蛇床子素的含量.药物分析杂志，1991，11（6）:359-360.
3 张灵灵.妇阴康洗涤剂质量标准研究.江西中医学院学报，2003，15（2）:53-54.
4 国家药典委员会.中国药典，2005版（一部）.北京:化学工业出版社，2005，附录31.
作者单位:
1 030001山西太原，山西医科大学病理生理学教研室
2 030001山西医科大学药学院药化教研室（△ 为通讯作者）
3山西华康药业股份有限公司技术科
（编辑:日 强）