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【摘要】 目的 建立健骨灵胶囊的质量标准。方法 采用高效液相色谱法测定了柚皮苷的含量， C18色谱柱（250mm×4.6mm, 5μm），流动相为甲醇-1%醋酸溶液（40：60），流速1.0ml/min，检测波长283nm。鉴别采用TLC方法。结果 柚皮苷与样品中其他组分分离效果较好，柚皮苷在31.1～93.3μg范围具有良好线性关系，相关系数 r = 0.9996； 平均回收率为99.49%,RSD为1.58%（n=6）。结论 采用此法测定健骨灵胶囊中柚皮苷的含量，准确可靠，可用于该制剂的质量控制。
【关键词】 健骨灵胶囊；柚皮苷；高效液相色谱法
【Abstract】 Objective To establish the quality standard for JianguLing capsule.Methods HPLC method was used to determine the contents of Naringin in JianguLing capsule. The chromatographic conditions included C18 column（250mm×4.6mm,5μm）,mobile phase consisted of Methyl Alcohol-1% HAC（40:60）,the flow rate was 1.0ml/min,the detection wavelength was 283nm. Naringin in JianguLing capsule was identified by TLC.Results A satisfactory separation between Naringin and impurity was obtained. The calibration curve of Naringin was linear at the range of 31.1～93.3μg， r = 0.9996.The average recovery was 99.49% and RSD was 1.58%（n=6）.Conclusion The method is accurate and can be used to control the quality of Jiangguling capsule.
【Key words】 JianguLing capsule;Naringin; HPLC;TLC
健骨灵胶囊是由单味中药骨碎补经提取活性成分后，加工制成的胶囊［1］。具有补肾、强骨之功效，用于老年性及绝经性骨质疏松［2］。本实验对该制剂中的柚皮苷进行了薄层鉴别［3］，并用高效液相色谱法对制剂中的柚皮苷进行了含量测定。
1 仪器与试剂
岛津LC-10AT型高效液相色谱议，岛津SPD-10A型紫外检测器，LIBROR AEL-160型万分之一电子分析天平，DS-250A型超声仪（功率250W，频率20～40kHz）。 柚皮苷对照品（中国生物制品检定所，批号：110722－200309），甲醇为色谱纯，其他试剂均为国产分析纯。供试品由贵州省生物技术研究开发基地提供。
2 方法与结果
2.1 定性鉴别 取本品内容物0.3g，精密称定，加甲醇10ml，超声10min，放冷，滤过，作为供试品溶液。另取柚皮苷对照品，加甲醇制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（10：2：3）的上层溶液为展开剂展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，在105℃加热至斑点清晰，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图1。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件与系统适应性试验 C18硅胶键合柱（ 4.6mm×250mm, 5μm）,进样量20μl，流动相为甲醇-1%醋酸溶液（40：60），流速1.0ml/min，检测波长283nm。在上述色谱条件下，柚皮苷与其他峰呈良好分离，见图1。理论板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。
2.2.2 供试品溶液制备 取键骨灵胶囊内容物0.3g，精密称定，置具塞瓶内，精密加入甲醇15ml，称定重量，超声（功率250W，频率20～40kHz）30min，放冷, 再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.2.3 对照品溶液制备 精密称取在110℃干燥至恒重的柚皮苷对照品15.55mg，配制成 0.1555 mg/ml溶液，即得。结果见图2。图2 （A）供试品HPLC色谱图；（B）柚皮苷HPLC色谱图
Fig2 HPLC chromatograms of sample（A）and standard Naringin（B）
2.2.4 线性关系考察 取100℃恒温干燥5h的柚皮苷对照品15.55mg，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度作为对照品液。取对照品溶液稀释成31.1、46.65、62.2、77.75、93.3μg/ml的柚皮苷对照品溶液，按照上述色谱条件，分别进样10μl，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，柚皮苷的含量为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程得A=23805C+36057，相关系数 r= 0.9996，表明柚皮苷在31.1～93.3μg范围具有良好线性关系。
2.2.5 精密度试验 精密量取柚皮苷对照品溶液（62.2μg/ml）10μl，注入液相色谱仪，重复进样5次，测定峰面积，以柚皮苷的峰面积计算，RSD=0.64%,表明本方法精密度良好。
2.2.6 稳定性试验 精密量取同一供试品溶液,每隔2h进样1次，共测5次,以柚皮苷峰面积计算，供试品在10h内, 柚皮苷峰面积积分值前后无明显变化，RSD=0.60%,表明供试品溶液在10h内具有良好的稳定性。
2.2.7 重现性试验 取同一批号供试品，照含量测定方法制备供试品5份，进行测定,以柚皮苷的峰面积计算，RSD=1.31%，说明此法重现性良好。
2.2.8 回收率试验 取同一供试品约0.15g，精密称定6份，分别置具塞瓶内，精确加入柚皮苷对照品溶液（浓度31.1μg/ml）15ml，加甲醇定容至10ml容量瓶，同法测定柚皮苷含量。结果6次测定回收率均在98%～101%之间，平均回收率为99.49%，RSD=1.58 %，结果列于表1。 表1 健骨灵胶囊中柚皮苷的回收率（ 略）
2.2.9 样品含量测定 精密吸取供试品溶液10μl，平行2次进样测定，共测10批样品，结果见表2。表2 健骨灵胶囊柚皮苷含量测定结果 （ 略）
3 讨论
本实验对柚皮苷的提取溶剂进行了筛选［4，5］，用甲醇、丙酮、水、乙醇作溶剂进行超声提取，结果乙醇杂质峰较多，丙酮和水提取不完全，甲醇提取效果较好，故选用甲醇作为样品的提取溶剂。考虑到操作的简便性，用甲醇超声30min已能将柚皮苷提取完全，故选用甲醇超声30min作为样品处理条件。
在HPLC色谱条件研究中，对多种流动相及流速进行了考察，根据样品的分离度、保留时间等因素，确定了最佳流速为1ml/min；流动相为甲醇-1％醋酸（40:60）。
通过对以上实验条件的方法学考察，结果表明，本品采用HPLC色谱法测定健骨灵胶囊中的柚皮苷含量，方法简便可靠，分离度高，重现性好，可用于健骨灵胶囊的质量控制。
【参考文献】
1 国家药典委员会编.中国药典.北京：化学工业出版社，2005，179-180.
2 唐琪，陈莉丽，严杰. 骨碎补提取物促小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和钙化作用的研究.中国中药杂志.2004,29（2）:164-167.
3 李德勋.壮骨关节丸中淫羊藿、骨碎补的薄层色谱鉴别.中成药, 2003,25（8）:682-683.
4 罗杰，郑捷，曾亚伦,等. 骨仙片中柚皮苷的含量测定.中国中药杂志, 2003,28（7）:676-677.
5 周春玲，杨宁.HPLC测定筋骨丸中柚皮苷的含量.中成药, 2003,25（11）:938-939.
作者单位：550002 贵州贵阳，贵州省生物技术研究开发基地（△通讯作者）