活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3分子的构建及其致卵巢上皮性癌细胞凋亡的实验研究

《中华妇产科杂志》2007年第42卷第12期 中国研究者构建能自我激活的活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）3分子，并探讨其对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞的致凋亡作用。研究者利用基因重组技术构建活性caspase-3分子——rev-caspase-3及其重组腺病毒——Ad-rev-casp3；应用免疫组化方法、细胞计数试剂盒8、流式细胞仪和蛋白印迹法分别检测rev-caspase-3作用后卵巢癌细胞系AO细胞中活性caspae-3蛋白的表达情况、细胞存活率、凋亡率、细胞周期、caspase-3活性亚单位p17和聚（腺苷二磷酸-核糖）多聚酶（PARP）的分解产物p85的表达水平，应用透射电镜观察rev-caspase-3作用后细胞的超微结构，实时PCR技术检测细胞中凋亡相关基因的表达情况；建立卵巢癌裸鼠皮下及腹腔移植瘤模型，观测rev-caspase-3作用后裸鼠生存情况及肿瘤体积的变化。结果发现Ad-rev-casp3作用后的AO细胞中显著表达活性caspase-3蛋白，细胞质明显棕染；细胞中活性caspase-3亚单位p17和PARP裂解片段p85的表达水平升高。Ad-rev-casp3以感染复数（MOI）为70作用后的AO细胞存活率为30．3％，凋亡率为40．2％。Ad-rev-casp3以MOI=10作用后的细胞凋亡率只为3．4％，但此时S期细胞比例高达56．5％，G1期比例下降至9．8％，与未感染Ad—rev—casp3（MOI=0）的AO细胞的S期和G1期比例显著不同（P均〈0．05）。Ad-rev—casp3作用后的AO细胞呈现显著的凋亡形态改变，电镜下见明显的凋亡小体形成；细胞中活性caspase-3基因的表达水平显著升高，为9．44。Ad—rev—casp3能显著延长荷瘤裸鼠的生存期，平均生存时间为（213±16）d，并显著抑制移植瘤的生长，在第1次注射后53d时抑瘤率为70％。由此，研究者得出结论，表达rev—caspase-3的重组腺病毒载体对卵巢癌细胞有强烈的致凋亡作用，并可显著延长荷瘤裸鼠的生存期，抑制肿瘤生长。