自身免疫性疾病抗体检测微阵列制备条件的优化和初步应用

2006年11月30日 中华风湿病学杂志 2006 Vol.10 No.6 P.349-352 19 （济南）为了优化制备蛋白质微阵列的几个关键因素，初步建立自身免疫性疾病抗体检测微阵列，以期用于自身免疫性疾病的诊断。研究者选择与制备蛋白质微阵列有关的4个因素，即温育时间、封闭剂、封闭时间和与二抗结合时间，进行正交优化，得出制备蛋白质微阵列的最优化条件，并根据该条件，进一步确定6种自身抗原适合的点样浓度及血清的最佳稀释度。根据优化条件，制备出同时检测6种自身抗体的微阵列，并初步应用，与间接免疫荧光(ⅡF)法和酶联免疫吸附试验(ELISA)法加以比较，对结果进行评价。结果制备蛋白质微阵列的最佳优化条件是温育2 h，封闭剂采用含有1%小牛血清白蛋白和2.5%蔗糖的PBST，封闭时间为30 min，与二抗反应30 min，6种自身抗原适合点样浓度从100 μg/ml到300μg/ml不等，最佳血清稀释浓度是1:2。微阵列法对抗核抗体(ANA)的检测与ⅡF法相比，灵敏度是88.6%，特异度是83.3%，微阵列法对其他5种自身抗体的检测与ELISA法相比，灵敏度在80.0%～88.2%之间，特异度在90.2%～98.6%之间。可见上述优化条件适合于制备自身免疫性疾病抗体检测微阵列，微阵列检测结果与现有常规方法检测结果比较一致，值得推广应用。