变形链球菌AI-2活性测定及luxS基因同源重组质粒的构建

2008年07月28日 《中华口腔医学杂志》-2008年1期 -37-40页 医学空间（MEDcyber.com）7月28日消息，该项研究目的是构建用于转化变形链球菌的luxS基因缺失的同源重组克隆载体。采用的方法是利用哈氏弧菌（Vibrio harveyi）BB170作为报告菌株，对变形链球菌在不同生长时期诱导生物发光的能力进行测定，然后分别PCR扩增变链菌luxS基因上下游片段及质粒PJT10的红霉素抗性基因片段，采用分子克隆技术将基因片段依次双酶切后连接人载体pUC19，构建luxS基因缺失的重组质粒，转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞经筛选后，抽提重组质粒，进行酶切鉴定。结果变链菌国际标准株可诱导哈氏弧菌BB170的生物发光现象，提示变链菌中存在AI-2数量感应通路。构建的重组质粒pUCluxKO经PstI-BamHI双酶切，产物电泳在大约1000bp和5000bp处各见一条特异条带；经BamHI—KpnI双酶切，产物电泳在大约1500bp和4500bp处各见一条特异条带；经KpnI—EcoRI双酶切后，产物电泳在大约1000bp和5000bp处各见一条特异条带。由此得出结论变链菌luxS基因同源重组质粒构建成功，为进一步通过同源重组法构建变链菌luxS基因缺陷株奠定基础。