抗凝血酶基因G13328A杂合突变导致血栓形成

2006年01月04日 中华血液学杂志 2005 Vol.26 No.11 P.661-664 14 （上海）为了对1个遗传性抗凝血酶(AT)缺陷症家系进行AT抗原(AT:Ag)、活性(AT:A)和基因突变检测并对该突变导致的AT结构和功能的变化进行研究。研究者采用免疫比浊法和发色底物法分别检测AT:Ag和AT:A，用PCR法对先证者AT基因的7个外显子及其侧翼内含子序列进行扩增，PCR产物纯化后直接测序，检测其基因突变。根据基因检测结果，对家系成员相应外显子进行PCR扩增，扩增产物直接测序。用大引物法构建突变的AT表达质粒并瞬时转染COS-7细胞，用ELISA法检测细胞培养上清液和细胞内提取物中AT:Ag。结果先证者的AT:Ag和AT:A分别为179 mg/L和42.3%，为Ⅰ型AT缺陷；AT基因测序显示在AT外显子6区存在G13328A杂合突变，导致Ala(GCC)404→Thr(ACC)。对家系成员进行的基因测序显示有3人(Ⅱ2、Ⅱ3、Ⅲ2)存在该突变。突变质粒在细胞培养上清液和细胞内的AT:Ag分别为正常人的40%和68%。可见该家系为Ⅰ型遗传性AT缺陷症,G13328A杂合突变是导致先证者血栓形成的原因。