高分辨率HLA-DRB基因型分析方法的研究

2006年06月02日 中华泌尿外科杂志2005 Vol.26 No.11 P.739-742 9 （西安）为了采用焦磷酸微测序技术，建立一种高通量、高分辨率的HLA-DRB基因型分析新方法，为临床应用提供依据。研究者对HLA-DRB外显子2 DNA序列进行同源性分析，设计PCR引物，提取健康人外周血淋巴细胞基因组DNA，PCR扩增外显子2基因片段，克隆构建含有外显子2的重组质粒pMD/DRB3*02023。扩增产物经链亲和素包被磁珠纯化、变性、分离制备单链DNA测序模板，采用PSQ96焦磷酸测序仪进行实时测序，分析判断HLA-DRB基因型。结果扩增并克隆了HLA-DRB外显子2，焦磷酸微测序结果与克隆质粒常规测序结果比较，测序正确，与HLA数据库基因序列比较，可准确进行HLA-DRB基因型分析。采用重组质粒pMD/DRB3*02023和pMD/DRB1*0405等比例混合模拟杂合子基因型，焦磷酸微测序分析获得预期结果。可见焦磷酸微测序技术应用于HLA-DRB基因型分析具有高分辨率和快速等优点，可有效分析杂合子基因型，该新方法有望应用于器官及骨髓移植的供体/受体筛查。