人类8型疱疹病毒开放读码框73C基因原核

2007年05月10日 中华传染病杂志 2006 Vol.24 No.6 P.382-384 14 “医学空间”（MEDcyber.com）5月10日消息，（乌鲁木齐）为了构建人类8型疱疹病毒(HHV-8)基因开放读码框(ORF)73C重组原核表达质粒并诱导表达，获得HHV-8潜伏态相关核抗原重组蛋白，并对其免疫活性进行初步鉴定。研究者 软件设计引物，分别在引物两端添加特异的酶切位点，以pGEM-Teasy/ORF73质粒为模板，聚合酶链反应(PCR)扩增ORF73C基因序列，克隆入原核表达载体pET-28a(+)，构建原核表达质粒pET28a-ORF73C；转化E.coli DH5α，经酶切、测序鉴定其插入序列的正确性，转入E.coli BL21(DE3)，并诱导表达，以多聚组氨酸亲合层析柱纯化，凝胶蛋白电泳、Western印迹方法行表达蛋白的分析和抗原特异性免疫鉴定。结果 测序结果表明构建的pET28a-ORF73C原核表达质粒连接正确，插入的ORF73C基因片段为453 bp。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表明ORF73C基因成功表达，在相对分子质量20 000处有表达条带Western印迹分析显示重组蛋白能被卡波济肉瘤患者阳性血清识别，具有良好的抗原性。可见 成功构建了pET28a-ORF73C原核表达质粒，获得的纯化HHV-8潜伏态相关核抗原蛋白与卡波济肉瘤患者血清具有特异性识别，显示其作为检测抗原的可能，但其敏感性和特异性则有待进一步的验证。