核转录因子抑制剂对脂多糖诱导角膜基质细胞分泌细胞因子的影响

2008年06月27日 《中华眼科杂志》-2008年44卷1期 -61-66页 医学空间（MEDcyber.com）6月27日消息，该项研究目的是探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）对绿脓杆菌脂多糖（LPS）诱导的人角膜基质细胞核因子κB（NF—κB）活化与细胞因子释放的干预作用及其机制。方法为实验研究。原代培养人眼角膜基质细胞（HCFs），选取生长良好的传代HCFs分为对照组、LPS刺激组及PDTC预处理组。LPS组给予单纯LPS刺激，PDTC预处理组则在LPS刺激前先加PDTC培养30min，再给予相同浓度的LPS。在LPS刺激1、2、4及8h时，分别收集各组细胞和上清液，Western blot检测HCFs NF—κB的活化表达；酶联免疫吸附实验（EHSA）检测HCFs培养上清液中自细胞介素6（IL-6）和IL-8的分泌情况；逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测HCFs IL-6和IL-8 mRNA的表达。结果与对照组相比较，LPS刺激后，HCFs胞核NF—κB p65的表达明显升高，HCFs中IL-6与IL-8蛋白的分泌和mRNA的表达均显著升高。PDTC预处理30min后再给予LPS刺激，可部分抑制HCFs胞核中NF—κB p65的活化表达（t1h=9．3766，t2h=15．9011，t4h=12．5851，t8h=10．8346；均P〈0．01）；PDTC预处理可不同程度的下调LPS诱导的HCFs分泌IL-6、IL-8蛋白及IL-6、IL-8 mRNA的表达，二者均明显低于同时间点LPS组HCFs的表达，差异均有统计学意义（IL-6蛋白：t1h=7．9154，t2h=10．8630，t4h=8．2451，t8h=13．5063；IL-8蛋白：t1h=8．5663，t2h=20．5169，t4h=25．1580，t8h=34．8699；IL-6 mRNA：t1h=12．0235，t2h=13．2894，t4h=24．0799，t8h=27．2261；IL-8 mRNA：t1h=20．9424，t2h=24．1314，t4h=29．8580，t8h=47．9442；均P〈0．01）。由此得出结论绿脓杆菌LPS可引起HCFs NF—κB活化，促进细胞因子的表达，PDTC可部分抑制LPS对NF-κB的激活，下调相应细胞因子的表达。