中国研究者探讨PTEN基因逆转卵巢上皮性癌细胞耐药的机制

《中华妇产科杂志》2007年第42卷第9期 中国研究者通过检测PTEN基因在卵巢上皮性癌（卵巢癌）顺铂敏感细胞株0V2008及0V2008配对的顺铂耐药细胞株C13K中的表达，探讨转染PTEN基因能否逆转C13K细胞对顺铂的耐药及其相关机制。研究者通过半定量RT-PCR技术和蛋白印迹法检测0V2008和C13K细胞中PTENmRNA和蛋白的表达。将野生型PTEN基因真核表达质粒在脂质体介导下转染C13K细胞，同时以转染空载体和未转染的C13K细胞作为对照，分别应用RT-PCR技术检测各组细胞PTENmRNA表达的变化，应用蛋白印迹法检测各组细胞PTEN、蛋白激酶B（AKT）及磷酸化AKT（p-AKT）蛋白表达的变化；四甲基偶氮唑蓝（M1Tr）比色法观察转染PTEN基因后C13K细胞对顺铂敏感性的变化，流式细胞仪分析顺铂作用后的细胞凋亡情况。结果发现（1）PTENmRNA在0V2008和C13K细胞中的表达水平分别为1．02±0.05和0．45±0.03，而0V2008、C13K细胞中PTEN蛋白的表达水平分别为1.02±0.07、0．55±0．03，两种细胞PTENmRNA和蛋白的表达水平分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。（2）PTEN基因转染48h后，C13K细胞中PTENmRNA、蛋白的表达水平分别为2.04±0．10和0．94±0．04，分别与转染空载体和未转染的C13K细胞比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）；p-AKT蛋白的表达水平（0.94±0．07）较转染空载体（1．66±0．10）和未转染（1．68±0．14）的C13K细胞显著降低（P〈0．05）。（3）转染PTEN基因的C13K细胞对顺铂的半数抑制浓度（IC50）为（7.2±0．3）μmol／L，明显高于转染空载体和未转染的C13K细胞[分别为（12．7±0．4）、（13．0±0．3）μmol／L，P〈0，05]。（4）顺铂作用24h后，转染PTEN基因、转染空载体和未转染的C13K细胞的凋亡率分别为（41.7±0.9）％、（18．6±0．7）％和（15，3±0．8）％，前者明显高于后两者（P〈0．01）。由此，研究者得出结论，PTEN基因在0V2008细胞中的表达明显高于C13K细胞。转染野生型PTEN基因能有效提高C13K细胞内PTEN基因的表达，并通过降低C13K细胞中AKT磷酸化的水平恢复C13K细胞对顺铂的敏感性。