2.1 美蓝染色法
2.1.1 吕氏碱性美蓝染色液
美蓝 0.3g
95%乙醇 30mL
0.01%氢氧化钾溶液 100mL
将美蓝溶解于乙醇中,然后与氢氧化钾溶液混合。
2.1.2 染色法
将涂片在火焰上固定,待冷。滴加染液,染1~3min,水洗,待干,镜检。
2.1.3 结果
菌体呈蓝色。
2.2 革兰氏染色法 2.2.1 结晶紫染色液 结晶紫 1g 95%乙醇 20mL 1%草酸铵水溶液 80mL 将结晶紫溶解于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合。 2.2.2 革兰氏碘液 碘 1g 碘化钾 2g 蒸馏水 300mL 将碘与碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水至300mL。 2.2.3 沙黄复染液 沙黄 0.25g 95%乙醇 10mL 蒸馏水 90mL 将沙黄溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释。 2.2.4 染色法 2.2.4.1 将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染1min,水洗。 2.2.4.2 滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗。 2.2.4.3 滴加95%乙醇脱色,约30s;或将乙醇滴满整个涂片,立即倾去,再用乙醇滴满整个涂片,脱色10s。 2.2.4.4 水洗,滴加复染液,复染1min。水洗,待干,镜检。 2.2.5 结果 革兰氏阳性菌呈紫色。革兰氏阴性菌呈红色。 注:亦可用1:10稀释石炭酸复红染色液作复染液,复染时间仅需10s。 | |
2.3 耐酸性染色法(萎-倪二氏法) 2.3.1 石炭酸品红染色液 碱性品红 0.3g 95%乙醇 10mL 5%酚水溶液 90mL 将品红溶解于乙醇中,然后与酚溶液混合。 2.3.2 3%盐酸-乙醇 浓盐酸 3mL 95%乙醇 97mL 2.3.3 复染液 吕氏碱性美蓝染色液。 2.3.4 染色法 2.3.4.1 将涂片在火焰上加热固定,滴加石炭酸品红染色液,徐徐加热至有蒸气出现,但切 不可使沸腾。染液如因蒸发减少时,应随时添加。染5min,倾去染液,水洗。 2.3.4.2 滴加盐酸-乙醇脱色,直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定,一般为1~3min),水洗。 2.3.4.3 滴加吕氏碱性美蓝染色液,复染30s~1min,水洗,待干,镜检。 2.3.5 结果:耐酸性细菌呈红色,其他细菌、细胞等物质呈蓝色。
2.4 柯氏染色法 2.4.1 染色液 2.4.1.1 0.5%沙黄液。 2.4.1.2 0.5%孔雀绿液。 2.4.2 染色法 2.4.2.1 将涂片在火焰上固定,滴加0.5%沙黄液,并加热至出现气泡,约2~3min,水洗。 2.4.2.2 滴加0.5%孔雀绿液,复染40~50s。水洗,待干,镜检。 2.4.3 结果 布氏杆菌呈红色,其他细菌及细胞呈绿色。
2.5 奥尔特氏荚膜染色法 2.5.1 染色液 沙黄 3g 蒸馏水 100mL 用乳钵研磨溶解。 2.5.2 染色法 将涂片在火焰上固定,滴加染色液,并加热至产生蒸气后,继续染3min。水洗,待干,镜检。 2.5.3 结果 炭疽芽胞杆菌菌体呈赤褐色,荚膜呈黄色。 2.6 瑞氏染色法 2.6.1 染色液 瑞氏色素 0.1g 甲醇 60mL 用乳钵研磨溶解。 2.6.2 染色法 2.6.2.1 涂片待自然干燥后,滴加染色液,固定1min。 2.6.2.2 加入等量蒸馏水(pH6.5),染色3~5min。 2.6.2.3 用蒸馏水冲洗,待干,镜检。
2.7 鞭毛染色法 2.7.1 染色液的配制 2.7.1.1 甲液:称丹宁酸5g、氯化高铁(FeCl3)1.5g,溶于100mL蒸馏水中,待溶解后加入1%的氢氧化钠溶液1mL和15%的甲醛溶液2mL。 2.7.1.2 乙液:称2g硝酸银溶于100mL蒸馏水中。 在90mL乙液中滴加浓氢氧化铵溶液,到出现沉淀后,再滴加使其变为澄清,然后用其余10mL乙液小心滴加至澄清液中,至出现轻微雾状为止(此为关键性操作,应特别小心)。滴加氢氧化铵和用剩余乙液回滴时,要边滴边充分摇荡,染液当天配,当天使用,2~3d基本无效。 2.7.2 染色法 在风干的载玻片上滴加甲液,4~6min后,用蒸馏水轻轻冲净。再加乙液,缓缓加热至冒汽,维持约半分钟(加热时注意勿使出现干燥面)。在菌体多的部位可呈深褐色到黑色,停止加热,用水冲净,干后镜检,菌体及鞭毛为深褐色到黑色。 2.8 碱性复红染色法 将0.5g碱性复红染料溶解于20mL95%乙醇中,然后用蒸馏水稀释至100mL。如有不溶物时,可用滤纸过滤,或静置后取上清液备用。 注:本染色液系用于苏云金芽胞内蛋白质毒素结晶的染色,藉以与蜡样芽胞杆菌相区别
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作者:
2008-2-3