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(1．天津理工学院化工系，天津300191；2．南风化工集团日化部，山西运城044000)
摘要：建立了一种以Nova-PakCN． 氰基柱为固定相，以V(二氯甲烷)：V(乙醇)=97：3为流动相，添加N一苄氧羰基一S苯基一L．半胱胺酸甲酯(MBP( )为手性离子对试剂，拆分普萘洛尔对映体的高效液相色谱的分析方法。当c(MBPCE)=3．5 mmol／L，流动相流速为0．5 ml／min，检测波长为254 am 时 普萘洛尔对映体的分离选择性为1．15，分离度为1．02，线性范围为0．1～4．0 mg／ml，浓度测定的变异系数为0．21％ ～0．86％ 。
关键词：普萘洛尔；手性离子对试剂；对映体；HPLC；拆分
中图分类号：O 658 文献标识码：A 文章编号：1671—3206(2003)02—0048—03
药物中的许多化合物都含有手性中心，手性药物的对映体在生理作用和代谢过程方面存在显著差异，研究开发手性药物对映体的分离分析方法是十分必要的。临床上广泛应用的普萘洛尔是一种重要的8受体阻滞剂，一直以外消旋体的形式人药，动物实验表明，S(一)一普萘洛尔对8受体的阻滞程度比R(+)一普萘洛尔约大100倍；R(+)一普萘洛尔不仅对8受体的阻滞作用很小，而且有避孕作用，可作为一种有效的避孕药。因此，以外消旋体形式人药的普萘洛尔不仅治疗心脏系统疾病的效能不佳，而且容易带来副作用。将外消旋普萘洛尔拆分为手性纯化合物，并作为两种不同的药物分别人药，是创制具有我国自有知识产权的新药，提高我国普萘洛尔药品质量的有效方法。近年来，我们一直在进行通过拆分外消旋普萘洛尔以制备手性纯普萘洛尔药物的研究工作，拆分产品的对映体纯度检测是改进拆分工艺的前提，本文研究了用手性离子对色谱法(CIRC)分离分析普萘洛尔对映体纯度的方法。
分离分析手性药物对映体的纯度多采用具有手性固定相(CSP)的高效液相色谱法，采用CIRC分离分析手性药物对映体的研究甚少。CSP合成困难且价格昂贵，相对而言，手性离子对色谱法的流动相选择范围宽，手性离子对试剂的来源广泛，因此采用CIRC法分离分析手性药物的对映体纯度具有很好的发展前景。本文研究了以手性N一苄氧羰基一苯基一L-半胱胺酸甲酯(MBPCE)为离子对试剂在氰基柱上分离分析普萘洛尔对映体的新方法，研究了离子对试剂的种类和浓度、流动相的组成和流速等对分离的影响，考察了定量测定普萘洛尔对映体的线性范围和变异系数。本方法可用于手性纯普萘洛尔药品的质量检验和外消旋体普萘洛尔产品的分析。
1 实验部分
1．1 试剂与仪器
MBPCE(天津理工产业集团提供)；外消旋普萘洛尔(北京第二制药厂)；R(+)一普萘洛尔和S(一)一普萘洛尔(Sigma公司)；其余试剂均为分析纯。
Waters高效液相色谱仪，510泵，484 UV检测器；810色谱工作站。
1．2 色谱分离条件
色谱柱：Nova-Pak CN—lip 8 x 100 mm car—tridge；柱温：室温；流动相：v(氯甲烷)： V(乙醇)=97：3，其中C(MBPCE)=3．5 mmol／L；流速：0．5ml／min；检测波长：254 ilia。
2 结果与讨论
2．1 手性离子对试剂及其浓度的选择
考察了MBPCE、L半胱胺酸和奎宁等几种手性离子对试剂对普萘洛尔对映体的拆分能力，其中以MBPCE为手性离子对试剂时，普萘洛尔的对映体达到最大程度的分离，结果见图1。
这是由于普萘洛尔与离子对试剂间的作用力是偶极一偶极作用力、氢键作用力和范得华力等，MBPCE分子中所含的N一卞氧羰基、S-苯基和甲基酯基以不同的空间结构取向与普萘洛尔对映体生成稳定性差异较大的缔合物，从而使两种对映体达到分离的目的。
流动相中M 的浓度对分离选择性的影响见表1。
由表1可知，MBPCE浓度在0．5～4．5 mmol／L范围内时，普萘洛尔对映体的分离度和选择性均随MBPCE浓度的增加而增大；当继续增大MBPCE的浓度时，普萘洛尔对映体的分离度和选择性下降，同时柱反压亦随之增大。MBPCE 的浓度选择3．5 mmol／L为宜。
2．2 乙醇含量对分离选择性的影响
流动相中加入适量的乙醇后，由于乙醇分子能够以氢键的形式在固定相表面与手性离子对试剂和待分离的溶质所生成的手性离子对化合物发生吸附性竞争，减弱了手性离子对化合物在固定相表面的过强的吸附，改善了色谱峰的拖尾现象，从而提高了普萘洛尔对映体的分离度，结果见表2。
2．3 流动相流速的选择
流动相流速对普萘洛尔对映体的分离度也有一定的影响。随着流动相流速的增加，普萘洛尔对映体的分离度下降，当流速为0．5 ml／min时达到最佳分离。
2．4 定量测定的线性范围
配制质量浓度分别为0．1 mg／ml、1．5 mg／ml、2．5 mg／ml、4．0 mg／ml、4．5 mg／ml的R(+)一普萘洛尔和S(一)一普萘洛尔的标准溶液，在选定色谱条件下，分别进样10 l，考察了色谱峰面积(y)与普萘洛尔对映体的质量浓度(X)的线性关系。在0．1- 4．0 mg／ml范围内，R(+)一普萘洛尔和S(一)一普萘洛尔对映体的峰面积对质量浓度的线性回归方程分别为YR=3 140+60 300XR (r=0．998 4)，ＹＳ=4 590+55 759Ｘs (r=0．999 0)。
2．5 方法的精密度测定
分别准确配制R(+)一普萘洛尔和S(一)一普萘洛尔含量已知的标准溶液三份，在选定色谱条件下各平行进样6次进行测定，结果见表3。点击放大
2．6 样品测定
分析了天津力生制药厂的盐酸普萘洛尔产品中的普萘洛尔含量，在选定色谱条件下进样分析，用外标法定量，测得每片中含R(+)一普萘洛尔5．04 mg，S(一)一普萘洛尔5．06 nag，普萘洛尔两种对映体的总含量为10．10 mg(标示量10 nag)。
3 结论
本方法快速、准确，是检测普萘洛尔产品中对映体含量的可*方法。
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Resolution of Propranolol enantiomers by HPLC witlI chiral ion pair agent
LI Nai—xuan ，YAN Xiu-fang ，XIAO Ru—ting
(1．Department of Chemical Engineering，Tianjin Institute of Technology，Tian]in 300191，China；
2．Department of Daily Ch~nical，Shanxi Nanfine Chemical Industry Group Co．，Yuncheng 044100，China)
Abstract：The method WaS studied in HPLC resolution of enantiomers of Propranolo1．Chromatographic condi．tions are with diehloromethane．ethanol aS mobile phase，V(diehloromethane)：V(ethano1)=97：3，containing methanol N-benzyloxycarbonyl-S-phenyl·L-cysteine ester(MBPCE)as ehiral ion pair agent，c(M口EjPCE)=3．0mmol／L．with the flow rate being 0．5 ml／min in Nova-Pak CN． column an d UV．detection at 254 nm．The method gave a separation selectivity of 1．15，a separation degree of 1．02，a linear ran ger of 0．1～ 4．0mg／ml and a co efficient of variation of 0．21％ ～ 0．86％ ．
Key words：Propran olol；chiral ion pair agent；enan tiomer；HPLC；resolution