红曲米中洛伐他汀的高效液相色谱含量测定前处理方法研究

(1湖南宏生堂制药有限公司 湖南 长沙 410014 ; 2 湖南宏生堂中药现代化研究所 湖南 长沙 410014)

摘 要 目的：对红曲米中洛伐他汀的HPLC含量测定的前处理方法进行研究。
方法：通过对比红曲米样品提取液经热处理与不经热处理后，于HPLC仪上测得洛伐他汀的含量。
结果：洛伐他汀的含量有很大的区别，经热处理者远大于不经热处理者。
结论：热处理的方法不能用于红曲米中洛伐他汀含量测定的前处理中。

    红曲米是一味传统中药，具活血化瘀、健脾消食之功效，现代研究证明红曲米中莫纳可林类有很好的降血脂作用，其中以莫纳可林K即洛伐他汀（lovastatin）为主要有效成分^[１]。有关红曲米中洛伐他汀HPLC法含量测定方法的报导较多，涉及的前处理方法多包括热处理，如采用乙酸乙酯萃取，置50℃温度下干燥后定容等。我们发现乙酸乙酯层干燥前和干燥后测得洛伐他汀的含量发生了很大的变化。同时在实验中也发现另一种来源的红曲米不经热处理直接测定，HPLC图谱中lovastatin峰前无明显的杂峰，这种红曲米在前处理中受热的影晌不大。本文仅就lovastain峰前有明显杂峰的红曲米进行比较实验。

美国PERKIN ELMER公司生产的HPLC仪：Series-200系列输液泵，LC-785A紫外检测器，Turbo-EL色谱工作站；超声波发生器(中船七院七二六所)；THZ-95型台式恒温振荡培养箱（北京四环科学仪器厂）；0.45m m微孔滤膜过滤器；洛伐他汀对照品（购自美国Merk公司）；甲醇(色谱纯)；磷酸、乙酸乙酯、乙醇均为分析纯；双重蒸馏水；红曲米样品由宏生实业公司综合部提供。
2．实验过程
2.1色谱条件
    色谱柱：Hypersil ODS2，5m ,4.6×200mm；流动相：甲醇-0.1% 磷酸水溶液（77：23）；流速：0.5ml/min；检测波长：238nm；进样量：10m l。方法学考察：洛伐他汀在1～50μg/ml浓度范围内线性关系良好，Y=1692+45613X，r=0.9999(n=6)。精密度RSD=1.16%(n=7)。平均加样回收率为95.28%,RSD=2.82%(n=5)。

2.2供试品溶液的制备

精确称取红曲粉5.0g，加入PH3.0的磷酸水溶液50ml,乙酸乙酯50ml,置摇床振摇(50℃,150r.min)2h,取出冷却后离心（1500r.min）15min。取乙酸乙酯层2.0ml3份，分别按下述方法处理：（1）置烘箱中50℃烘干后,加5ml流动相溶解,摇匀，再取1ml于4ml流动相中,摇匀；（2）放置低温(约10℃)凉干，加5ml流动相溶解, 摇匀，再取1ml于4ml流动相中,摇匀；（3）加入3ml流动相，摇匀，再取1ml于4ml流动相中,摇匀。
2.3 对照品溶液的制备

精密称取洛伐他汀对照品5mg，置100ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。配成浓度为0.05mg/ml的对照品溶液。
2.4 取对照品溶液、供试品溶液各10μl分别于HPLC仪上测定。
3．实验结果

表1 红曲米中lovastatin的含量测定结果(%)

经热处理和不经热处理的过程中lovastatin的含量有显著性差异（P＜0.001),即经热处理后含量增高一倍多。在不经热处理样品的色谱图上，lovastatin峰之前有明显的另一个色谱峰，经加热理后，该色谱峰几乎消失，见图1。
另外，供试品经烘干后，试管底部生成一种油状物，而低温凉干则无油状物产生。
4．讨论

4．1 上述实验结果表明，供试液经加热干燥之后，可能有莫纳可林类衍生物转化为洛伐他汀，使其含量测定结果明显升高。

4．2 据报导，红曲米中洛伐他汀含量测定的前处理方法还有:置索氏提取器中，用无水乙醇回流提取6h，提取液浓缩成浸膏样与硅胶拌样，60℃烘干12h等^[2]；用无水乙醇回流提取，浓缩成浸膏与硅胶拌样，60℃烘干12h等^[3]；用95%的乙醇热提，浓缩后与硅胶拌和低温干燥等^[4]。这些方法有一个共同特点：将提取液浓缩干燥。为此我们作了下述实验：用75%的乙醇超声提取后，比较提取液直接测定和浓缩干燥后测定，结果见表2。

表2 75%的乙醇提取法测定洛伐他汀的含量结果(%)

在用75%的乙醇为提取溶媒的情况下，热处理前后洛伐他汀的含量测定结果不同,即加热后高于加热前。因此，将提取液浓缩干燥这一过程不能用于红曲米中洛伐他汀含量测定的前处理。

图1 红曲米中洛伐他汀的HPLC色谱图 A-Lovastatin

热处理前色谱图

 热处理后色谱图

4.3取2.2项下乙酸乙酯提取液3ml上中性氧化铝柱，用25ml甲醇分次冼脱完全，定容于25ml容量瓶^[5]，测得含量与直接定容测定没有显著性差异,说明用乙酸乙酯萃取后直接定容测定的方法简便易行。

参考文献

[1]傅金泉.中国红曲及实用技术,1997:191

[2]宋洪涛,郭涛,张跃新等.中药红曲的生药学及质量控制标准的研究.《中国中药杂志》,1999,24(5):262

[3]宋洪涛,宓鹤鸣,郭涛等.HPLC法对不同来源红曲中洛伐他汀的定量分析.《中草药》,1999,30(2):100

[4]宓鹤鸣,宋洪涛,陈磊等.红曲中降脂活性成分的研究.《中草药》,1999,30(3):172

[5]张小茜,周富荣,石济民.高效液相色谱法测血脂康胶囊及红曲中洛伐他汀的含量.《中国中药杂志》,1997,22(4):222

作者： 2007-5-18