液相色谱-质谱联用法检测某些中药制剂中的格列本脲

 Detection of Glyburide in Traditional Chinese Medicine by Liquid Chromatography-Mass Spectrometry Method
SUN Yu—ming ，SUN Ling—ling ，ZHONG Da—fang
    Abstract Objective：An analytic technique using liquid chromatography(LC)coupled with electrospray-mass spectrometry(ESI-MS)has been developed for the identification of glyburide illegally added in traditional Chinese medicine preparations．Methods：The detection was performed on a C8 column with a mobile phase of aeetonitrile-water-formicacid(70：30：1)．The compound illegally added in traditional Chinese medicine preparations was identified according to the chromatographic behavior and mass spectral data by comparison with those of authentic standard．Results：Glyburide was found in all 6 samples．Conclusion：The method is selective．sensitive and reliable，can be used to detect the illegally added components in traditional Chinese medicine and control the quality．
    Key words：Traditional Chinese medicine；Antidiabetics；Glyburide；LC／MS
    近年来中药制剂的发展比较迅速，但在纯中药制剂中添加化学药，严重违反了国家法规，威胁患者的健康。如治疗男性性功能障碍的“纯中药”中加入“西地那非”；在减肥药中加入西布曲明或能导致人出现甲亢症状的甲状腺激素等。因此必须建立快速、灵敏、可靠的分析检测方法，为纯中药制剂验明正身。液相色谱-质谱联用(LC／MS)法以其高专属性的优势广泛应用于药物的定性检测中，本文建立了LC／MS法用于检测纯中药降糖药物中是否非法掺人化学降糖药物格列本脲。格列本脲为第二代磺酰脲类药物，若用量掌握不当，极易发生低血糖症。
    1 仪器与试药
    美国Finnigan公司LCQ型液相色谱(质谱联用仪，包括电喷雾离子源(ESI)以及LCQ数据处理系统，并配有直接进样用注射泵和250μL进样器；日本岛津公司HPLC系统(包括LC一10AD泵，Rheodyne 7125进样阀)。
    格列本脲对照品(纯度为99.5％，沈阳药科大学药剂教研室)；6种纯中药降糖药物(辽宁省药品检验所提供，分别为不同厂家6个批次：20030108，200203O2， 20020601， 010401， 20020621和20010313)；甲醇，乙腈(色谱纯，天津市康科德科技有限公司)，甲酸(分析纯，天津市博迪化工有限公司)，水为二次重蒸水。
    2 实验方法
    2．1 色谱条件 色谱柱：Zorbax Eclipse XDB-C8柱(5μm粒径，150×4.6mm，Agilent)；流动相：乙腈-水-甲酸(70：30：1)；流速：O.5mL/min；柱温：室温；进样量5OμL。
    2．2 质谱条件 电喷雾离子源，正离子检测，离子源喷射电压：4.50kV；毛细管温度：200℃；毛细管电压：6.25V；鞘气流速：1.05L/min；辅助气流速：O.15L/min；检测方式：一级全扫描方式、二级全扫描方式、三级全扫描方式和选择离子监测方式(SIM)。
    2．3 格列本脲标准溶液的配制 精密称取一定量的对照品置容量瓶中加人流动相溶解并稀释至刻度，使浓度为400μg/mL。
    2．4 受试溶液的配制 取不同批号的被试胶囊各10粒，取出内容物分别混匀，将相当于1粒胶囊内容物重量的样品分别置10 mL具塞玻璃试管中，加入3mL甲醇，涡流2min，超声20min，离心10min，取上清液用于分析测定。
    3 实验结果
    3．1 格列本脲的色谱和质谱行为 采用正离子检测方式对格列本脲对照品进行LC／MS分析，其保留时间为6.4 min；多级质谱分析结果，在一级全扫描质谱分析中产生的准分子离子[M+H]+峰为m／z494，[M+Na]+峰为m／z516，[2M+H]+峰为m／z 987，[2M+Ma]+峰为m／zlO09，在二级全扫描质谱分析中，分子中胍基左侧的酰胺键断裂产
生m／z369的碎片离子，进一步对m／z369进行三级全扫描质谱分析，主要产生左侧酰胺键断裂生成的碎片离子m／z169，总结其裂解途径，为实际样品中化合物的鉴定提供了可靠的依据。
    3．2 待测样品的检测结果 在相同的色谱及质谱条件下对6种纯中药制剂的甲醇提取液进行LC／MS分析，均检测到色谱行为与格列本脲对照品相同的化合物，而且在相应的一级全扫描质谱分析中检测到与格列本脲相同的准分子离子m／z494；为进一步确定所检测到化合物的结构，对其进行多级质谱分析，该化合物的二级及三级全扫描质谱与格列本脲对照品完全相同，由此可以证明在6种被试中药降糖药物中所检测到的化合物为化学药格列本脲。
    4 讨论
    文献中对格列本脲的检测方法有紫外检测法、荧光检测法和质谱检测法。中药制剂中通常都含有多种中药材，每种药材中均含有多种组分，采用紫外检测法或荧光检测法对中药提取液进行检测时，由于选择性不强，在干扰组分多的情况下，对待测物的色谱分离提出了更高的要求，因此可能会产生假阳性结果。本文采用LC／MS技术，将高效液相色谱的高分离能力与质谱分析的高选择性相结合，对纯中药制剂中非法掺入的化学降糖药格列本脲进行多级质谱分析，对其进行了结构确证，增强了检测结果的可信度。该法灵敏度高，选择性强，对该中药制剂的质量控制具有现实意义。
参考文献
1 Jonsson A，Hallengren B，Rydberg T，et a1．Effects and serum levels of glibenelamide and its active metabolites in patients with type 2 diabetea．Diatetes Obes Metab，2001，3(6)：403