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防止色谱柱堵塞
原因1:溶剂中的不溶物
— 应使用色谱纯溶剂,膜过滤(孔径不超过0.45μm)
原因2:样品中的不溶物
— 应对样品进行膜过滤(孔径不超过0.45μm)
原因3:泵,进样器等中的不溶物
— 在泵和进样器之间安装内置过滤器,在进样器和柱之间安装预过滤器
原因4:柱内不溶物的形成
4-1.由于溶剂的不互溶而产生的沉淀
—用能溶解沉淀物的溶剂冲洗色谱柱
4-2.在不互溶溶剂中由于进样而产生的沉淀
—检查样品液和流动相是否互溶
4-3.由于温度的改变或固定相的干涸而产生的沉淀
—将色谱柱密封紧,并保持室温恒定
操作压力上升故障排除
HPLC系统流程图:
吸入过滤器>>泵>>内置过滤器>>进样器>>预过滤器>>保护柱>>主分析柱>>检测器和排放系统
从流程图的末端依次断开部件,如从检测器开始断开,最容易引起阻塞的部件是:
预过滤器,保护柱和主分析柱
[注]:应记录新柱子在常规分析条件下的操作压力
柱堵塞的修复
步骤1:使用含盐缓冲液后(如离子对试剂)应用溶解性强的溶剂(如水)进行冲洗
步骤2:先断开检测器,然后用对来自样品中的物质有强溶解性的溶剂进行冲洗。
对于反相色谱柱,可使用甲醇,乙睛,四氢呋喃,氯仿,庚烷等,在此条件下,应避免溶剂的pH低于2或高于8
若经过步骤1和步骤2后,压力仍没下降至步骤3
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