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摘要：目的：建立青银注射液(青蒿，金银花)质量标准中的含量测定项。方法：用高效液相色谱法莉气相色谱法，分别测定青银注射液中绿原酸与樟脑的含量。结果：绿原酸对照品进样量在0．0476～0．3808μg范围内呈良好的线性关系(r=0．9999)，平均回收率为96．14％ ，RSD为0．88％( n=6)；樟脑对照品进样量在0．462～2．77 之间线性关系良好(r=0．9999)，平均回收率为100．22％，RSD为2．44％(n=6)。结论：方法简便快速，准确可靠，可作为该制剂的含量测定。
关键词:青银注射液 绿原酸 樟脑 含量测定 高效液相色谱法 气相色谱法
中文分类号：R927．2 文献标识码：A 文章编号：1001—1528(2004)08—0621—03
Determination of chlorogenic acid and camphor in Qingyin Injection
QIU Hua—tong ， TIAN ji ， FENG Wen—yu ， YANG Mo-kun2
(1．Institute D厂Medicine，Luzhou Medical College，Luzhou 646000，China；2．Chengdu Zhongchuan Medicine Institute，Chenggdu 610036，China)
KEY WORDS：Qingyin Injection；chlorogenic acid；camphor；determination；HPLC；GC
ABSTRACT：AIM：To establish the determ ination of quality standard for Qingyin Injection(Herba Artemisiae Annuae，Flos Lonicerae)．METHODS：The contents of chIorogenic acid and camphor in Qingyin Injection were determ ined by the HPLC and GC，respectively．RESULTS：Chlorogenic acid showed good linear relationship in the range of 0．0476～0．3808vg(r：0．9999)．The average recovery was 96．14％ ，RSD：0．88％( =6)；Camphor showed a good linear relationship at the range of 0．462～2．77 g(r：0．9999)．The average recovery was 100．22％ ，RSD：2．44％( ：6)，respectively．CONCLUSION：The method is simple，quick，accurate and reliable，and can be USed for the determ ination of this preparation．
青银注射液是由青蒿和金银花研制而成的中药新药，具有宣肺透邪，清热解毒之功效。临床用于外感高热证所致的高热、微恶风寒、汗泄不畅、头痛、咳嗽、痰粘、咽燥或咽喉红肿疼痛及上呼吸道感染、急性肺部感染等。
绿原酸与樟脑均是青银注射液中的主要有效成分之一，测定其含量即是本品质量控制的一项重要指标。绿原酸的含量测定方法较多，如紫外分光光度法，薄层扫描法，高效液相色谱法等。樟脑的含量测定有气相色谱法，高效液相色谱法。参考有关文献，本文建立的用高效液相色谱法和气相色谱法，分别测定青银注射液中绿原酸含量与樟脑含量的方法，具有分离效能高、灵敏、准确等优点。
1 材料与仪器
1．1 材料：青银注射液及分别缺青蒿、金银花的阴性对照液(本所提供)；绿原酸对照品及樟脑对照品(中国药品生物制品检定所)；甲醇为色谱试剂，其他试剂均为分析纯。
1．2 仪器：Cilson液相色谱仪(法国)，306泵，715数据处理软件系统，MD．119扫描紫外．可见检测器；岛津GC-7A气相色谱仪，CR．1A记录仪，氢火焰离子化检测器。
2 方法与结果
2．1 HPLC测定制剂中绿原酸含量
2．1．1 色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：Synchropak RP．100(5μm，150mm ×4．6mmlD)，ODS预柱(Alltech)；填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：甲醇-0．2mol/L磷酸二氢钠溶液(磷酸调pH为3．2)(15：85)；流速：1．0mL/min；柱温：40℃ ；检测波长：326nm；灵敏度：0．05AUFS。理论塔板数按绿原酸峰计算，应不低于4000。
在此条件下，供试液中绿原酸和其他组分可基线分离，绿原酸峰与相邻色谱峰的分离度大于1．5。
2．1．2 对照品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的绿原酸对照品适量，加甲醇溶解并制成每1mL含0．02mg的溶液(用棕色量瓶)，即得(2～10℃贮存)。
2．1．3 供试品溶液的制备：精密量取本品0．5mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液于棕色瓶中，即得(2～10℃贮存)。
2．1．4 测定法：按上述色谱条件，分别精密吸取对照品溶液lOμL及供试品溶液5～7μL，注人液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
2．1．5 线性关系考察：分别精密吸取对照品溶液(O．0238mg/mL)2，4，6，8，10，12，14及16μL，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积值(A)为纵坐标，进样量(C)为横坐标绘制标准曲线，其线性回归方程：A =35119．737C-174．263，r=0．9999( n=8)。进样量在0．0476～0．3808μg范围内呈良好的线性关系。
2．1. 6 精密度试验：精密吸取绿原酸对照品溶液lOμL，重复进样5次，测定峰面积。其RSD=1．06％ ，精密度良好。
2．1．7 稳定性试验：分别于0，4及8h，精密吸取供试品溶液5μL，依法测定绿原酸的峰面积，求得RSD=1．37％。结果表明本品供试品溶液在0～8h内是稳定的。
2．1．8 重复性试验：取同一批样品，制备5份供试品溶液，依法测定绿原酸的峰面积。RSD=0．71％。
2．1．9 加样回收率试验：精密量取已知含量(含绿原酸2．19μg/mL)的样品0．25mL，6份，每两份各分别精密加入绿原酸对照品贮备液(0．476mg/mL)1，1．2及1．5mL，以下按“2．1。3”项制备供试品溶液，依法测定。
2．2 GC测定制剂中樟脑含量
2．2．1 色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为2．1m×3．2mmlD不锈钢柱，以10％聚乙二醇-20M涂布在ChromosorbW．AW．DMCS80～ 100目担体上；柱温为130℃ ；检测器温度为170℃ ；流速为氮气40mL/min，氢气60mL/min，空气300mL/min。理论塔板数按樟脑峰计算，应不低于3000。
在选定条件下，供试液中樟脑与其他组分可基线分离，樟脑峰与相邻色谱峰的分离度大于1．5，阴性对照不发生干扰。
2．2．2 对照品溶液的制备：精密称取樟脑对照品50mg，置100mL量瓶中，加50％乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1mL含樟脑0．5mg)。
2．2．3 供试品溶液：取本品5支的溶液，混匀，即得。
2．2．4 测定法：按上述色谱条件，分别精密吸取对照品溶液2 L及供试品溶液2～4μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。即得。
2．2．5 线性关系考察：按上述色谱条件，分别精密吸取樟脑对照品溶液(0．462mg/mL)1，2，3，4，5及6μL，注入气相色谱仪，测定峰面积。以峰面积值(A)为纵坐标，进
样量(C)为横坐标，得线性回归方程A =95850．959C-818．33，r=0．9999( n=6)。进样量在0．462～2．77pg之间，线性关系良好。
2．2．6 精密度试验：取供试品溶液，依法测定樟脑含量。连续进样5次，测定结果分别为0．3150、0．3134、0．3115、0．3126及0．3136mg/mL ，X=0．3132mg/mL ，RSD =0．41％ 。
2．2．7 稳定性试验：取本品供试品溶液，分别于0，4及8h，依法测定樟脑含量。测定结果分别为0．3150、0．3126及0．3095mg/mL ，X = 0．3124mg/mL ，RSD =0．88％ 。
2．2．8 重复性试验：取本品同一批样品的5份供试品溶液，依法测定樟脑含量。其结果分别为0．3098，0．3201，0．3138，0．3165及0．3079mg/mL ，X=0．3136mg/mL 。RSD =1．58％ 。2．2．9 加样回收率试验：精密量取已知含量(含樟脑0．3136mg/mL)的本品供试品溶液2mL，置5mL量瓶中，如此取6份，每两份各分别精密加入樟脑对照品溶液(0．5544mg/mLI1)0．5，1．0及1．5mL，再加50％乙醇至刻度，摇匀，依法测定。
3 讨论
3．1 绿原酸的检测波长，一般在324～330nm之间。本实验以甲醇为溶剂，经对照品溶液及供试品溶液在200～400nm波长范围的紫外扫描，确定其检测波长为326nm。
3．2 绿原酸供试液在放置过程中有见光、受热后不稳定，易分解的现象[3,7]，故测定绿原酸的供试液，应置棕色瓶中于冰箱内保存。
3．3 上述两种含量的测定方法，也分别适用于本制剂的原料药材及提取物中绿原酸与樟脑的含量测定。
参考文献：
[1] 王宝栗．中成药质量标准与标准物质研究[M]．北京：中国医药科技出版社。1994：371—373．
[2] 刘伟，杜天信。郑松波。等．小儿清热解毒口服液中绿原酸的薄层扫描测定[J]．中成药。1989，11(8)：14—15．
[3] 张丹。李章万。姜焱．HPLC测定金银花、茵陈及1O种中成药中绿原酸的含量[J]．药物析分杂志，1996。16(2)：83—85．
[4] 陈定一。周原。谢文．高效液相色谱法测定清开灵注射中绿原酸和黄芩甙的含量[J]．中成药，1992，14(6)：11．12．
[5] 王宜详。杨建国．气相色谱法测定十滴水中樟脑和桉油精含量[J]．中成药。1990。12(8)：41—42．
[6] 曾德成．麝香舒活灵质量标准的研究[J]．中成药。2000。22(9)：613—616．
[7] 顾利红。朱品亚．日光和温度对绿原酸供试液稳定性的影响[J]．中成药，1999。21(11)：568—569