气相色谱法测定γ-亚麻酸和二高γ-亚麻酸含量

摘要：建立了γ-亚麻酸和二高γ-亚麻酸含量测定的气相色谱面积归一化方法。γ-亚麻酸和二高γ-亚麻酸在样品处理和色谱条件上是完全一致的，仅是出峰时间上有差别，经精密度、重现性、回收率实验，γ-亚麻酸RSD分别为1．51 、1、89％和0．98％，二高γ-亚麻酸RSD分别为1．45 、1．15％和0．81 。相关性分析r值均达到极显著水平。用面积归一化法进行γ-亚麻酸和二高γ-亚麻酸含量测定能够达到简便、准确、快速、误差小的目的。
关键词：γ-亚麻酸；二高γ-亚麻酸；气相色谱
中图分类号：O 657．71 文献标识码：A 文章编号：1672—5425(2005)01一OO5O—O3

     合成前列腺素E (Prostaglamdi E )是以月见草油中分离得到的 亚麻酸为前体物质[1]。γ-亚麻酸经过还原反应、磺化反应、增碳反应、水解反应等步骤而合成二高 亚麻酸，然后通过生物合成前列腺素E 。
     高纯度的γ-亚麻酸才能合成二高γ-亚麻酸，因此有必要建立一种快速、简便测定γ-亚麻酸和二高γ-亚麻酸的方法为质量控制提供保证。目前国内测定γ-亚麻酸多是采用气相色谱外标或内标法[2]，对于二高γ-亚麻酸的检测有报道用红外光谱法[1]，作者通过实验确立了采用气相色谱法的面积归一化法来计算γ-亚麻酸和二高γ-亚麻酸的方法。

l 实验
1．1 仪器与试剂：GC-14B气相色谱仪(日本岛津)，水浴锅(郑州杜甫仪器厂)；γ-亚麻酸标准品、二高γ-亚麻酸标准品(吉林药物检验所)，二高γ-亚麻酸样品(自行合成)，γ-亚麻酸样品(从月见草油中富集得到)，K0H，FB3-乙醚，石油醚，甲醇，均为分析纯。

1．2 方法
1．2．1 色谱条件：色谱柱：毛细管柱(20m×30m)，温度：柱箱230℃，进样口250℃，检测器280℃ ；压力：N2 140 kPa，H270 kPa，Air 5O kPa。
1．2．2 样品及标准品的处理：取样品或标准品4滴置于10mL具塞试管中，加入0．5 mol/L 的K0H甲醇溶液2 mL于63℃水浴中皂化20 min，加入BF3-乙醚溶液0．2 mL，63℃水浴中甲酯化5 min，取出冷水冷却，加入2 mL石油醚，振摇，吸取上层2 L进样，按面积归一法计算。

2 结果与讨论
2．1 不同批次γ-亚麻酸、二高γ-亚麻酸样品和月见草油中γ-亚麻酸峰面积和含量的相关性实验
2．1．1 不同批次月见草油γ-亚麻酸和三次包合后γ-亚麻酸峰面积和含量的相关性经相关分析知不同批次不同含量的月见草油中γ-亚麻酸的峰面积和含量(％)相关性达到了极显著水平(r=0．992)，采用面积归一化法进行γ-亚麻酸含量计算比较简便、快速、误差也小，原因是该色谱条件下月见草油中的5种脂肪酸完全能够分开。对月见草油γ-亚麻酸经富集后纯度达90 以上时，主要是γ-亚油酸和γ-亚麻酸(见图lb)。对不同批次富集后的γ-亚麻酸的峰面积和含量(％)分析相关性也达到了极显著水平(r=0．9997)。
2．1．2 不同批次二高γ-亚麻酸峰面积和含量的相关性分析
样品二高γ-亚麻酸采用面积归一化计算含量时，峰面积和含量的相关性达到了极显著水平(r=O．9842)，由于二高γ-亚麻酸的合成是从高纯度的γ-亚麻酸为起始物，因此也只有两个峰，但出峰的时间上拖后(见图1c)。
2．2 线性关系的考察：精密称取γ-亚麻酸或二高γ-亚麻酸标准品20 mg置于1O mL容量瓶中，按1．2．2方法进行处理，精密吸取2 mL石油醚萃取的上清液1．0 L、1．5 L、2．0 L、2．5 L、3．0 L，按l-2．1的色谱条件进行色谱分析，结果见表3。
    表3说明在10～30 g范围内γ-亚麻酸和二高γ-亚麻酸峰面积积分分值和含量成极显著的相关性，其r值分别为0．995和0．9997 。
2．3 精密度和重现性考察：精密度考察；精密吸取标准品溶液(10μg/mL )1μL注入气相色谱仪连续5针，记录峰面积积分值。
    重现性考察：取自制的样品1μL，重复5次取样，记录峰面积积分值。经分析γ-亚麻酸和二高γ-亚麻酸的精密度RSD分别为1．51 和1．45％，重现性RSD分别为1．89 和1．15 。
2．4 回收率的测定：精密称取已知含量的样品适量，精密加入一定量的标准品，按样品处理操作，进样2 μL，按相关性所得峰面积和含量的关系转换成含量。结果见表4。
    表4结果说明γ-亚麻酸和二高γ-亚麻酸的平均回收率分别为98．92 和99．44 ，RSD 分别为0．98 和0．81 ，说明样品处理是可靠的。

3 结论
(1)对不同批次不同含量的月见草油中γ-亚麻酸的峰面积和含量的相关性分析可以看出相关系数r=O．992，达到了极显著水平，结合图谱可知月见草油的脂肪酯主要是硬脂酸、软脂酸、油酸、亚油酸和一γ-亚麻酸5种脂肪酸，在该色谱条件下，这5种脂肪酸的分离效果较好，因此可以采用面积归一化法计算含量。经富集后即纯度在9O 以上的γ-亚麻酸峰面积和含量的相关性分析知，r=0．9997，也达到了极显著水平，富集后只剩下亚油酸和γ-亚麻酸两种组分。
(2)对不同批次的二高γ-亚麻酸的峰面积和含量的相关分析r=0．9842达到了极显著水平，在该色谱条件下也能够采用面积归一化法计算含量，但γ-亚麻酸和二高γ-亚麻酸的差别仅在于出峰时间上不一致。

参考文献：
[1] 孙启良．前列腺索E1合成工艺的改进[J]．白求恩医科大学学报．1995，21(4)：425-426．
[2] 吕东阳，张大雷，蓝宗城．气相色谱法测定消脂软胶囊中γ-亚麻酸的含量[刀．黑龙江医药，2003．16(1)：3-4．
[3] 魏晓舒．气相色谱内标法测定月见草油软胶囊中γ-μ亚麻酸的含量[J]．现代应用药学，1996，13(1)：55-56．