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应用LC-MS/MS 同时测定食品中氯霉素类药物的残留量

来源:中国色谱网
摘要:氯霉素类药物是一种广谱抗菌药,对多种病原菌都有较强抑制作用,常用于动物疾病的预防及治疗。氯霉素类药物除了代表药氯霉素(Chloramphenicol,CAP)外,还有甲砜霉素(Thiamphenicol,TAP)、氟甲砜霉素(Florfenicol,FF)。现代医学证明氯霉素会抑制骨髓造血功能,引起再生障碍性贫血。约1/3000的人对氯霉素过敏,从......

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  氯霉素类药物是一种广谱抗菌药,对多种病原菌都有较强抑制作用,常用于动物疾病的预防及治疗。氯霉素类药物除了代表药氯霉素(Chloramphenicol,CAP)外,还有甲砜霉素(Thiamphenicol,TAP)、氟甲砜霉素(Florfenicol,FF)。
  现代医学证明氯霉素会抑制骨髓造血功能,引起再生障碍性贫血。约1/3000的人对氯霉素过敏,从而引起贫血症状,此症状的出现与否与剂量无关,所以很多国家禁止将氯霉素使用在食用性动物上。但因其价格便宜,抗菌谱广,仍被少数厂家违规使用。氯霉素在食品中的残留已经引起世界各国的高度重视,欧盟规定在食品中氯霉素零允许量,即不得检出。现考虑到检测方法的检测限等因素,暂定氯霉素在食物中的含量不得大于0.3μg/kg,随着检测方法的完善,该限量有可能进一步降低。

  甲砜霉素是氯霉素进行结构修饰后的产物,毒性和药理活性均比氯霉素小,在我国和日本等国允许其使用,而美国则禁止其在水产品中使用。现欧盟对甲砜霉素的限量为100μg/kg。氟甲砜霉素是1990年由美国Schering-Plough公司对甲砜霉素进行结构修饰而研制出的新型广谱抗菌药,主要用于水产、禽类、牲畜的病害防治。现欧盟对其的限量为100μg/kg。

  近年来,我国出口食品中氯霉素超标事件屡次发生,主要在虾肉和蜂蜜中有氯霉素检出。欧盟对我国实行了虾肉和蜂蜜禁运,严重影响到我国出口贸易,因此建立一种快速、准确、灵敏度高的残留检测方法,就显得十分重要。

  氯霉素类药物的测定方法主要有酶联免疫法(Enzyme-linkedImmunosorbentAssay,ELISA)、气相色谱-电子捕获检测(GC-ECD)、气相色谱法-质谱法(GC-MS、GC-MS/MS)、液相色谱法(HPLC)、液质联用(LC-MS、LC-MS/MS)等方法。ELISA方法使用酶联免疫检验试剂盒,如荷兰推出的测定氯霉素残留的酶联免疫测定试剂盒Quik-card,又称Lacardtest试剂盒,该试剂盒用于测定牛、猪、羊等肌肉中氯霉素残留,也可检测牛奶中氯霉素的残留,另外还有用它检测鸡蛋、尿液中氯霉素的报道。一般来说ELISA用于快速大规模筛选,在基层实地检测较多见,氯霉素的检出限只能达到10μg/kg,远低于欧盟的0.3μg/kg的要求,由于抗体的批次不同,测定结果将出现一定差异,重复性差,也可能出现微小差异,精密度也达不到要求,而且它的特异性很强,不能进行多残留检测,试剂昂贵,易出现假阳性结果。

  在GC-ECD、GC-MS、GC-MS/MS方法中,为了改善其色谱行为,一般需要用BSTFA在65±5℃反应30min来硅烷化,方法烦琐,其灵敏度也只有0.2-0.1ppb[6,7];HPLC的灵敏度达不到要求[8];而LC-MS/MS法,可通过第一级质谱选择出母离子,采用多离子反应监测(MultipleReactionMonitoring,MRM)技术极大地减少了背景干扰,降低噪音,提高灵敏度,是氯霉素类药物残留检测的首选方法。

  为了有效消除提取、净化等过程中氯霉素的损失,克服了仪器精密度的问题,所以本方法利用d5-CAP为内标,使检出限(LOD)能达到0.02-0.2ng/mL。本文使用高速均质,液相萃取,固相萃取的预处理方法,能对多种性质的样品进行分析,如蜂蜜等液态样品,鱼肉、虾肉等固体样品。通过有机溶剂去蛋白,正己烷萃取脂肪的办法,去除了样品中绝大多数杂质的同时未对氯霉素的损失造成影响。

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作者: 未知 2009-4-18
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