中成药中非法掺入对乙酰氨基酚的检测方法研究

　　【摘要】 目的建立中成药中非法掺入对乙酰氨基酚的检测方法。方法采用化学法、薄层色谱法、高效液相色谱法对可能掺入对乙酰氨基酚的中成药进行分析，并用高效液相色谱-二极管阵列检测以及直接HPLC-MS联用技术进行定性鉴定。结果测定了25个厂家的29批药，发现其中有一厂家的同一种药的3批都非法掺入了对乙酰氨基酚。结论 所建方法专属性强、灵敏度高，操作方便，可作为监测掺有对乙酰氨基酚中成药的有效方法。

　　【关键词】  中成药； 扑热息痛； 化学反应； 薄层色谱； 高效液相色谱； 二极管阵列； 质谱

　　Studies on the Detection Methods of Paracetamol Illegally Mixed in Traditional Chinese Medicine Preparations

　　NING Suyun，LU Fangzheng，GUO Xingjie

　　(1.Shenyang Pharmacological University，Shenyang 110016,China；2.Shanxi Biological Application Vocational Technological College, Taiyuan 030031, China)

　　Abstract:ObjectiveTo establish methods for detecting paracetamol mixed illegally in traditional Chinese medicine(TCM)preparations．MethodsChemical methods, TLC and HPLC methods were used for the separation and determination of preparations suspected of addition of paracetamol, and paracetamol was identified by diode array detector and HPLC-MS．Results29 batches products from 25 factories were determined. 3 batches　of which contained paracetamol. ConclusionThe methods are specific and sensitive, and　can be used to detect the TCM preparations.

　　Key words:Traditional Chinese medicine (TCM) preparations；  Paracetamol；  Chemical reaction；  TLC；   HPLC；  Diode array detector；  MS

　　对乙酰氨基酚(paracetamo1，又名扑热息痛)是临床上常用的解热镇痛药。一些不法厂商为增加疗效，擅自在中成药中添加对乙酰氨基酚，可能产生不可预知的严重不良反应［1］。因此建立行之有效的方法检测中成药中的对乙酰氨基酚，对打假治假有重要意义。本文对中成药中添加该化学药品的检测方法进行了研究，并对25个厂家生产的29批清热解毒类中成药进行了检查。

　　1  试样与试剂

　　对乙酰氨基酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号100018-200408）；中成药（具清热解毒功效，来自25个厂家，共29批）；甲醇为色谱纯；水为二重蒸馏水；其它试剂均为分析纯。

　　2  检测方法

　　首先采用化学反应对官能团的专属性进行鉴别，对是否添加对乙酰氨基酚作出初步判断。如果化学反应为正反应，进一步采用薄层色谱法、高效液相色谱法定性。如果经薄层色谱分析，在对照品斑点处有相应斑点，可进一步用高效液相色谱法以保留时间定性，再用二极管阵列紫外光谱定性，若样品与对乙酰氨基酚对照品的紫外光谱一致，可认为样品中掺有对乙酰氨基酚。若有条件还可用HPLC-MS联用技术或直接电喷雾离子阱质谱技术进一步确定。

　　2.1  化学反应法［2］

　　2.1.1  取本品细粉3 g，加稀盐酸5 ml，置水浴上加热回流40 min，放冷；取上清液0.5 ml，滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3 ml稀释后，加碱性β一萘酚试液2 ml，振摇显红色。

　　2.1.2  取本品细粉3 g，用乙醇20 ml分两次研磨使对乙酰氨基酚充分溶解，取上清液，合并蒸干，残渣用0.5 ml水溶解。水深液加三氯化铁试液，即显蓝紫色。

　　2.2   薄层色谱法

　　2.2.1  色谱条件

　　薄层板为硅胶HF254（5 cm×20 cm，自制，约0.3 mm厚）；展开剂为甲苯－无水乙醇（2∶1）；展距15 cm；254 nm紫外灯下检视。

　　2.2.2  操作方法

　　取对乙酰氨基酚对照品适量，加甲醇制成每毫升中含对乙酰氨基酚1 mg的溶液，作为对照品溶液。取样品细粉2 g，置10 ml量瓶中，加甲醇适量，混匀，超声处理10 min，加甲醇至刻度，混匀，滤过，作为供试品溶液。吸取对照品溶液和供试品溶液，各点样10 μl，上行展开，晾干，检视。薄层色谱图见图1。

　　2.2.3  结果本实验的最低检测限为1 μg。对乙酰氨基酚的临床使用剂量一般为0.3～0.6 g［3］，因此掺伪的量通常较大（一般为数10 mg），本方法完全能保证掺伪样品的检出。同时，根据样品中对乙酰氨基酚斑点的大小和深浅，与对照品的斑点目测比较可对掺入的量作出估计，也可进一步通过薄层扫描定量。

　　2.3  高效液相色谱法

　　2.3.1  仪器与色谱条件

　　岛津LC-2010A液相色谱仪。色谱柱为十八烷基硅胶键合相(依利特，4.6 mm×150 mm，5 μm)，并加C18预柱。流动相为甲醇-0.2%冰醋酸溶液(12∶88)。流速0.8 ml/min。检测波长243 nm。进样量20 μl。柱温20℃。

　　2.3.2 方法

　　取对乙酰氨基酚对照品适量，加流动相制成每毫升中含25 μg的溶液，作为对照品溶液；取样品0.5 g，置100 ml量瓶中，加流动相适量，混匀，超声处理10 min，加流动相至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。对照品溶液和供试品溶液分别进样，记录色谱图。见图2。

　　2.3.3  结果本实验的最低检测限为2 ng。在对乙酰氨基酚对照品出峰处，样品色谱中有相应色谱峰，进一步用二极管阵列比较样品和对照品的紫外光谱，发现样品和对照品的紫外光谱一致，则更进一步确证此色谱峰为对乙酰氨基酚。对照品和供试品的二极管阵列紫外光谱图见图3。根据样品中色谱图的峰面积与对照品峰面积比较，可计算样品中对乙酰氨基酚掺入的量。

　　2.4  高效液相色谱-质谱联用技术采用高效液相色谱-质谱联用技术，可以对高效液相色谱分离出的对乙酰氨基酚峰进一步作质谱分析鉴定，样品显示与对乙酰氨基酚对照品相同的准分子离子峰［M+H］+（m/z 152.1）及碎片离子峰，证实样品中添加了对乙酰氨基酚。 见图4。

　　【参考文献】

　　［1］吴春敏，陈海滨．中成药中非法添加化学物质的现状与对策［J］．海峡药学，2003,15(6)：107.

　　［2］国家药典委员会．中国药典，Ⅱ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：170.

　　［3］王丽霞，李力，谢燕霞，等．含化学药（西药）成分中成药的安全使用［J］.药学服务与研究，2002，2(4)：213.