高效液相色谱法测定蛭龙血通胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及Rb1的含量

　　【摘要】目的用高效液相色谱法（HPLC）法测定蛭龙血通胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及Rb1的含量。方法色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶 ,流动相为乙腈 -水 ,梯度洗脱。结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及Rb1分别在0.106～2.650 μg， 0.424～10.600 μg，0.423 2～ 10.587 μg之间呈良好的线性关系 ；制剂中 3种成分的平均回收率分别为 92.7%，93.4%和95.7%； RSD分别为2.10％ (n=6)，2.11％ (n=6)和1.39％ (n=6) 。结论该方法简便、准确、分离效果好，无干扰，可用于蛭龙血通胶囊的质量评价。

　　【关键词】  三七 三七皂苷R1 人参皂苷Rg1 Rb1 高效液相色谱

　　蛭龙血通胶囊是由三七、水蛭等5种药材组成的中药复方制剂，系中药6类新药，具有活血祛淤 、通脉活络、益气安神的功效，以三七为原料的各种制剂采用了多种测定方法，为严格控制产品质量，我们采用了HPLC作为检测手段，对蛭龙血通胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及Rb1进行含量测定研究。

　　1  仪器与材料

　　1.1  仪器

　　日本岛津液相色谱仪，包括LC－2010A紫外检测器、四元泵、自动进样器。

　　1.2 试刘与对照品

　　乙腈为色谱纯迪马公司生产；水为娃哈哈超纯水；甲醇为分析纯；三七皂苷R1、人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1对照品，均来源于中国药品生物制品检定所，供含量测定用；样品为药业公司提供。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件

　　色谱柱为Agilen  SB－C18，（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈―水按表1进行梯度洗脱；检测波长为203 nm；流速1.0ml·min-1；进样量10 μl。表1  流动相（略）

　　2.2  对照品溶液的制备

　　精密称取三七皂苷R1，人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成每毫升含三七皂苷R1 0.1 mg，人参皂苷Rg10.4 mg和人参皂苷Rb10.4 mg的混合溶液，即得。

　　2.3  供试品溶液制备

　　取装量差异项下的本品，研细，精密称定2.5g，精密加甲醇50 ml，称定重量，放置过夜，置80℃水浴中保持微沸2 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 ml，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。

　　分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，得到蛭龙血通胶囊的色谱分离图，见图1、图2。

　　2.4  专属性按供试品溶液的制备方法

　　制成缺三七的阴性样品。取样品，对照品及阴性样品按含量测定方法试验，结果在与对照品相同保留时间未见色谱峰。阴性样品见图1～3。

　　2.5 精密度

　　取同一对照品溶液，各10 μl，连续进样6次，分析，计算，结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的峰面积的RSD分别为2.09％，0.35％和0.31％，表明本法的精密度良好。

　　2.6 线性关系的考察

　　分别精密吸取对照品溶液1，5，10，15，20，25μl，注入液相色谱仪，以峰面积积分值为纵坐标，以进样量为横坐标，绘制标准曲线，分别得回归方程：三七皂苷R1为Y=271 621X+7 898.1，相关系数r=0.998 0；人参皂苷Rg1 为Y=392 803X+9 280.1，    相关系数r=0.999 5；人参皂苷Rb1为Y=276 761X+21 789，相关系数r=0.999 7。结果表明线性关系良好，其线性范围分别为三七皂苷R1为0.106～2.650 μg；人参皂苷Rg1为0.424～10.600  μg；人参皂苷Rb1为0.423 2～10.587 μg。

　　2.7  重复性实验

　　取同一批供试品（批号为060902）6份，按“2.3”项供试品溶液制备项下的方法操作，测定，计算。结果含量平均值为3.19 mg/粒，RSD为2.43%。表明本法的重复性良好。

　　2.8  回收率实验

　　分别精密吸取浓度为1.65 mg/ml的三七皂苷R1 对照品溶液1 ml、浓度为1.63 mg/ ml的人参皂苷Rg1对照品溶液4 ml和浓度为1.81 mg/ ml的人参皂苷Rb1对照品溶液4 ml，加入同一具塞容量瓶中，共取6份，分别蒸干，分别取批号为( 060902)的供试品6份，各1.2 g，置上述6个容器中，精密称定，按“2.2”项供试品溶液的制备，制成6份供试液，按上述色谱条件进行测定（见表2）。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的平均回收率分别为92.7% (n=6)、93.4% (n=6)和95.7% (n=6)； RSD分别为2.10％ (n=6)、2.11％ (n=6)和1.39％ (n=6), 结果表明本法的回收率良好。表2  回收率实验的测定结果（略）

　　2.9 样品测定结果

　　按上述含量测定方法对10批样品进行测定，结果见表3。表3  样品测定结果（略）

　　3 讨论

　　三七中主要成分为皂苷类成分，其中三七皂苷R1，人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1为其有效成分之一。实验中曾参考有关文献［1］ 进行提取、分离，但由于本品为复方制剂，成分复杂，且待测成分在使用紫外低波长检测时，受到结构相似的皂苷类干扰而难以得到有效分离，因此经多次实验，采用梯度洗脱的色谱分离，得到了良好的效果。

　　【参考文献】

　　［1］国家药典委员会.中国药典(Ⅰ部)［S］.北京：化学工业出版社，2005：10.