高效液相色谱法测定补血调经片中原儿茶酸的含量

　　【摘要】目的采用高效液相色谱法测定补血调经片中原儿茶酸的含量。方法采用乙腈－0.2%磷酸溶液（4∶96）作为流动相。检测波长为260 nm，测定补血调经片中原儿茶酸的含量。结果标准曲线线性范围为0.0165～0.165 μg，r=0.999 99；平均回收率为99.56%，RSD%＝0.39%。结论该实验方法线性关系良好、简便、准确、专属性强，可作为补血调经片控制原药材和药品的质量方法。

　　【关键词】  补血调经片； 高效液相色谱法； 原儿茶酸

　　Abstract：ObjectiveTo establish a quality control method of Buxue Tiaojing Tablets.MethodsThe HPLC system of a Alltima HP C18（4.6 mm ID×250mm, 5 μm） was used and a mixture of acetonitrile-2% phosphoric acid (95∶5, volume ratio) as the mobile phase. The detection wavelength of Protoca-technic acid was 260 nm. ResultsProtocatechuic acid showed good linearity (r=0.999 99) within the range of 0.0165～0.165 μg. The average recovery was 99.56%, RSD% was 0.39%. ConclusionThe method is simple, accurate and exclusive and it can be used for the quality control of Buxue Tiaojing Tablets.

　　Key words：Buxue Tiaojing Tablets;  HPLC;   Protocatechuic acid

　　补血调经片是由鸡血藤、阿胶、岗稔子、肉桂、党参等18味中药组成，具有补血理气、调经的功效，用于妇女贫血、面色萎黄、赤白带下、经痛、经漏、闭经等症。其处方组成比较复杂，鸡血藤为方中君药，其功能主治为补血，活血，通络。用于月经不调，血虚萎黄，麻木瘫痪，风湿痹痛。与该产品的功能主治密切相关，本实验以其所含有效成分之一原儿茶酸为指标，采用高效液相法测定方中的原儿茶酸的含量。

　　1   仪器与试药

　　岛津LC-20A高效液相色谱仪；SPD-M20A二极管阵列检测器；岛津UV-2550紫外分光光度计；Mettler PB303-N 电子分析天平（准确度：1 mg）；Mettler AE-160电子分析天平（准确：0.1 mg；Mettler AG-135电子分析天平（准确度：0.01 mg）；HS10260D型超声清洗器。原儿茶酸对照品（批号：110809－200102）由中国药品生物制品检定所提供，乙腈为色谱纯，甲醇、磷酸均为优级纯，水为超纯水。

　　2  方法与结果［1～3］

　　2.1  测定波长的选择用紫外分光光度计对对照品溶液在200～400 nm波长范围进行扫描，结果在260 nm波长处具有最大吸收。故选择260 nm作为测定波长。

　　2.2  对照品溶液的制备精密称取原儿茶酸对照品适量，加50%甲醇溶液制成每毫升含16 μg的溶液，即得。

　　2.3    样品提取方法的考察

　　2.3.1    醋酸乙酯提取法  精密称取本品2 g，加入0.2%盐酸1 ml湿润，加入醋酸乙酯50 ml，称定重量，超声提取（250 W，40 kHz）25 min，放置至室温，加醋酸乙酯补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液25 ml，蒸干，残渣加50％甲醇溶解，定量转移至25 ml容量瓶中并稀释至刻度，摇匀，即得。

　　2.3.2    甲醇溶液提取法  精密称取本品2 g，加入50%甲醇溶液50 ml，称定重量，超声提取（250 W，40 kHz）30 min，放置至室温，加50%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液，即得。

　　结果，醋酸乙酯提取法提取产物较甲醇提取法所提的产物的色谱峰分离清晰，用二极管阵列检测器检测，醋酸乙酯提取法所提产物的峰纯度高，三点法相似度在0.999以上，故采用选择方法醋酸乙酯提取法。

　　2.4    供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，研细，精密称取2 g，按“2.3.1”方法提取原儿茶酸提取液样品。

　　2.5  色谱条件色谱柱为Alltima HP C18  （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈－0.2%磷酸（4 : 96）；柱温40℃；流速0.7 ml/min；测定波长260 nm。进样量10 μl。对照品、供试品溶液与鸡血藤药材提取液的色谱图如图1～3。

　　供试品溶液理论踏板数为14 601，结合本法具体情况，暂定其理论板数按原儿茶酸峰计算，应不得低于5 000。

　　2.6    阴性对照实验为进一步考察实验设计的合理性，按原处方工艺制成不含鸡血藤的阴性对照样品，按“2.5”项下方法测定，阴性对照样品如图 4。由图4可以看出阴性对照色谱中，原儿茶酸峰位置无干扰峰，证明本法是合理可行的。

　　2.7    标准曲线的绘制取原儿茶酸对照品适量，加50%甲醇溶液制成16 μg/ml的溶液。精密吸取上述溶液1，3，5，7，10 μl进样，HPLC测定。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线。曲线回归方程为Y=6 368.46X-5.59（r=0.999 99）。表明进样量在0.016 5～0.165 μg内，呈良好的线性关系。

　　图1  原儿茶酸对照品液相色谱图（略）

　　图2  供试品液相色谱图（略）

　　图3  鸡血藤药材液相色谱图（略）

　　图4  阴性对照液相色谱图（略）

　　2.8    方法学考察

　　2.8.1    精密度实验取同一供试品溶液10 μl，连续进样5次。结果见表1。结果表明，方法具良好的精密性。

　　表1  精密度实验结果（略）

　　表2  稳定性实验结果（略）

　　2.8.2    稳定性实验取同一供试品溶液10 μl，分别在0，2.5，6，9，12 h，照“2.5”项下方法测定峰面积，结果如表 2。由表 2可以看出，峰面积RSD为0.68%，表明峰面积变化很小，原儿茶酸在12 h内基本稳定。

　　2.8.3    重复性实验取同一供试品5份，按“2.5”项下方法独立测定。结果见表 3。RSD为1.65%，结果表明，本法重复性良好。

　　表3  重现性实验结果（略）

　　2.8.4    回收率实验称取5份已知含量约1 g样品（含量：0.10 mg/片），精密加入原儿茶酸对照品溶液（0.116 7 g/ml）1 ml，挥干，按“2.5”方法测定，计算回收率，结果见表4。如表4所示，测得的平均回收率分别为99.56%，RSD＝0.39%，结果表明，该方法具有很好的回收率。

　　表4  重复性实验结果（略）

　　2.9    样品测定及限度要求  按“2.5”项下的方法测定样品3批。结果见表5。如表5所示，3批样品的平均含量为0.10 mg/片；按照“2.5”色谱条件测定投料用鸡血藤药材，平均含量为0.044%。考虑到药材的波动及煎煮过程中的损失，暂定每片含鸡血藤以原儿茶酸(C7H6O4)计，不得少于0.08 mg。

　　表5  含量测定结果（略）

　　2.10    原料药材的测定结果  取投料用鸡血藤药材0.8 g，照正文方法实验。结果见表 6。

　　表6  药材测定结果（略）

　　3   讨论

　　本文采用HPLC法测定补血调经片中原儿茶酸含量，本方法简便，准确，精密度高，重复性好，能够有效地控制补血调经片的质量。

　　【参考文献】

　　［1］ 国家药典委员会.中国药典［S］.北京:化学工业出版社,2005:134.

　　［2］ 苗明三, 李振国.现代实用中药质量控制技术［M］.北京:人民卫生出版,2003：81.

　　［3］ 林春华,朱品业,胡家炽,等.高效液相色谱法测定壮腰健肾丸原儿茶酸含量［J］.中国中药杂志, 1996, 21(5): 288.