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【摘要】 目的 建立测定薄荷通吸入剂主要成分含量的气相色谱-质谱联用方法（GCMS法）。方法以环己酮、萘为双内标物，采用气相色谱-质谱-选择离子检测（GCMS/SIM）联用方法中对薄荷通吸入剂主要成分进行含量测定。SPB1701（30 m×0.25 mm×0.25 μm）石英毛细管柱；80～250℃程序升温，选择m/z 43，95，71，120离子碎片分别对桉油精、樟脑、薄荷脑和水杨酸甲酯含量进行检测。结果桉油精、樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯线性范围分别为0.24～97 μg/ml（r=1.000 0）、5.00～202 μg/ml（r=0.999 9）、2.30～947 μg/ml（r=0.999 8）、0.68～271 μg/ml（r=1.000 0）；检测限分别为2.4，5.0，2.3，6.8 ng/ml；平均回收率为98 %～101%，相对标准偏差为1.9%～2.5%。结论该方法快速、准确、灵敏度高、重现性好，可用于同类产品质量控制。
【关键词】 气相色谱-质谱；选择离子检测；薄荷
薄荷通吸入剂是由薄荷脑、樟脑、水杨酸甲酯、桉油、冰片等组成的吸入剂，有散风开窍作用。用于伤风鼻塞的辅助用药。由于薄荷脑、樟脑、水杨酸甲酯、桉油等组分都是易挥发性成分，可采用气相色谱法。目前，对这些成分的分析主要采用气相色谱法［1～3］。本实验采用气相色谱-质谱-选择离子检测（GCMS/SIM）联用方法中对薄荷通吸入剂主要成分进行含量测定。
1 器材与方法
1.1 仪器与装置
岛津GC17A & GCMS-QP5050A气相色谱-质谱联用仪。GC17A气相色谱（多级程序控温、调压、载气流量控制）；二级真空系统（转子泵与涡轮泵）；电子轰击离子源（EI）； 四级杆质量分析器；检测分析工作站。
1.2 材料与试剂
薄荷脑、樟脑、水杨酸甲酯、桉油精对照品（中国药品生物制品检定所提供）；无水乙醇（广州试剂厂，分析纯）；环己酮（广州试剂厂，分析纯）；萘（广州试剂厂，分析纯）；薄荷通吸入剂（汕头市五环制药厂，批号070201，070202，070203）。
1.2.1 对照品溶液的配制
对照品储备液的配制：精密称取一定量的薄荷脑、樟脑、水杨酸甲酯和桉油精对照品，置100 ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，配成每毫升含薄荷脑、樟脑、水杨酸甲酯、桉油精分别为6.0，1.2，1.6，0.6 mg的储备液。
内标储备液配制：精密称取一定量的环己酮、萘，置100ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，配成每毫升各含环己酮、萘分别为0.7，1.1 mg的储备液。
1.3 实验条件
1.3.1 色谱条件
色谱柱为SPB1701 石英毛细柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；进样口温度250℃ ；升温程序为柱温80℃保持3 min，以10℃/min升至120℃保持3 min；再以10℃/min升至250℃保持3 min；载气为高纯氦气，流速1.0 ml/min，柱前压65kPa；进样量1 μl；分流比10∶1。
1.3.2 质谱条件
电子轰击离子源（EI）；电子能量70eV；传输线温度250℃；激活电压1.5 V；溶剂延迟3.5 min，运行时间为4～25 min，扫描范围为 29～500 amu。用SIM模式，4→6 min，选择碎片离子m/z 55，43；8→11 min选择碎片离子m/z 95，71，128，120。
2 结果
2.1 柱温条件选择
按下面条件:①进样口温度250℃；升温程序：70℃保持3 min，以3 ℃/min升至200℃。②进样口温度250℃ ；升温程序：70℃以10℃/min升至250℃。③进样口温度250℃ ；升温程序：80℃保持3min，以10℃/min升至120℃保持3 min；再以10℃/min升至250℃保持3 min进行测定，结果③分离效果好。因此选③作为本法分析条件。在该条件下，桉油精、樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯对照品的保留时间与样品峰1，2，3，5的保留时间基本一致，进一步通过标准谱库检索得到峰1，2，3，4，5分别桉油精、樟脑、薄荷脑、异龙脑、水杨酸甲酯。见图1。
2.2 阴性干扰实验
按处方比例配制缺桉油精、樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯的阴性空白对照溶液，按上述条件下测定，测得供试品溶液和阴性对照溶液的总离子流质谱图（见图1），结果在桉油精、樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯相同保留时间处，供试品溶液出现对照品色谱峰，阴性对照品无该色谱峰出现，表明阴性对照无干扰。
2.3 质谱条件选择
环己酮、桉油精、樟脑、薄荷脑、萘、水杨酸甲酯的GC的保留时间分别为4.510，5.579，9.110，9.545，9.817，10.233 min。为了减少干扰，提高方法选择性，采用选择离子检测法（SIM），选择丰度高，高质量端的离子进行测定。环己酮、桉油精、樟脑、薄荷脑、萘、水杨酸甲酯质谱图中强度最高的峰分别是55，43，95，71，128，120。选择这些基峰为特征峰进行定量分析，干扰少，定量准确度更高。
2.4 线性范围和检测限
精密称取对照品储备液0.01，0.1，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0 ml置于25 ml量瓶中，加环己酮储备液和萘储备液各1.0 ml，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品待测液系列，进样量：1 μl，每种浓度的待测液进样3次，按上述气相色谱与质谱条件分析。以桉油精与环己酮浓度比，樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯与萘浓度之比为横坐标，以二者的峰面积之比的3次平均值为纵坐标，作定量工作曲线。标准工作曲线，线性范围和检出限如表1。表1 标准工作曲线、线性范围和检出限（略）
2.5 精密度实验
选用标准待测液中桉油精、樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯浓度最大的样品，按上述条件连续进样5次，进样1 μl/次，测得桉油精、樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯对照品的RSD为1.1%，1.0%，0.7%，1.4%，结果表明精密度较好。
2.6 稳定性实验
选用同一批号(070201)的样品，按样品测定方法制备供试品溶液，进样1次/h，1 μl/次，按上述条件共进5次，测定桉油精、樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯含量，考察样品的稳定性，四者的RSD为2.1%～2.9%，结果表明在4 h内样品溶液基本稳定。
2.7 重复性实验
取同一批号(070201)样品，按样品测定方法重复5次。桉油精、樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯平均含量（质量分数）分别为5.87%，12.32%，64.30%，16.80%；RSD分别为2.0%，2.3%，1.9%，2.5%。
2.8 加样回收实验
取已测定含量的样品2支，按“样品测定”项下的方法加入一定量的桉油精、樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯，精密加入内标萘140 mg和环己酮220 mg，制成供试品溶液，摇匀。进样1 μl，得结果及各组分回收率见表2。表2 薄荷通吸入剂加样回收实验结果（略）
2.9 样品测定
取本品2支，用无水乙醇将外壳内壁和含药棉芯洗净，30 ml/次，共5次，洗液并入200 ml量瓶中，加入环己酮140 mg和萘220 mg，加无水乙醇至刻度，摇匀。在精密量取1 ml，置25 ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。作为供试品溶液，按上述色谱、质谱条件，进样为1 μl，测定结果，代入线性方程计算桉油精、樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯含量。结果见表3。表3 薄荷通吸入剂样品测定结果（略）
3 讨论
本法在一次测定中能同时测定桉油精、樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯，操作简单，灵敏度高，与气相色谱法［2］相比灵敏度高出2数量级，最低检出限达到2.4 ng。另外，GC-MS有数据库检索功能，能快速判断目标成分，增加定性手段。
在本法条件下，处方中冰片成分中的异龙脑成分与内标物萘同时在保留时间9.8 min出峰，但由于两者的碎片离子峰不同，异龙脑的碎片离子峰的基峰m/z为95，萘的碎片离子基峰m/z为128，选m/z128为检测离子可以排除异龙脑的干扰。
由于桉油精与樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯出峰时间不集中在一时间段，因此，选用双内标能排除外界干扰,使各组分结果更准确。由于桉油精在低保留时间出峰，环己酮也在其附近出峰，因而，选环己酮为桉油精的内标物；由于萘出峰时间在樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯三者之间，因而选萘为樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯三者的内标物。通过选用环己酮和萘为内标，定量效果更准确，结果令人满意。
【参考文献】
［1］国家中成药标准汇编·眼科耳鼻喉科分册［M］.北京：中国中医药出版社，WS-11233(ZD-1233).
［2］肖树雄，马丽莎，郑剑红.气相色谱法同时测定薄荷通吸入剂中几种成分的含量［J］.数理医药学杂志，2005，18（1）：51.
［3］于超，孙冠芸，王宇，等.用气-质联用技术测定美声喉泰含片中薄荷脑含量［J］.中国中药杂志，2002，27（11）：846.