正交设计-重复试验法优选当归芍药散的提取工艺

　　作为一种慢性进行性精神衰退性疾病，老年性痴呆已引起当今社会医药学界的强烈关注^［1］，但是到目前为止，尚无疗效确切、毒副作用小的治疗方法和药物问世。为此，我们在文献研读的基础上，结合药效学试验，从疗效好、副作用小、能长期服用的中药复方中选择了当归芍药散进行抗老呆的实验研究，并取得明显进展。
　　当归芍药散由当归、白芍、川芎、茯苓、白术、泽泻6味中药组成。本文从加溶媒量、浸泡时间、提取时间、提取次数等因素入手，以芍药苷提取率为考察指标，对当归芍药散的提取工艺进行正交优化试验。由于正交表L₉(3⁴)各列均被因素排满，表中未留下空白列，也无历史资料提供经验误差，为避免增加试验次数，不使用要更大的正交表，故作重复试验，估算试验误差，进行方差分析，以确定各因素的显著性水平，从而得出当归芍药散的最佳工艺参数。
1　仪器、药材与试剂
　　全自动电光分析天平(上海天平仪器厂)，CQ250超声波清洗器(上海必能信超声有限公司)，日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪(配SPD-10A紫外可见检测器，C-R6A数据处理机)，DWK套式电热器(江苏南通荣源联合电器厂)。
　　甲醇(色谱纯)购自淮阴精细化工研究所，重蒸水自制，其他试剂(分析纯)购自南京化学试剂厂。
　　药材购自南京市药材公司，经中国药科大学王强教授鉴定，当归为Angelica sinensis (Oliv.) Diels的干燥根，白芍为Paenia lactiflora Pall.的干燥根，川芎为Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎，茯苓为Poria cocos (Schw.) Wolf的干燥菌核，白术为Atractylodes macrocephala Koidz. 的干燥根茎，泽泻为Alisma orientalis (Sam.) Juzep.的干燥块茎。
2　实验方法与结果
2.1　提取溶剂的选择
　　根据指标成分芍药苷的理化性质，分别以水和50%乙醇为提取溶媒，在同等条件下考察了两种提取物的药效和指标成分提取率。
　　小鼠避暗试验显示，在相同给药剂量下(折合生药量)，两种提取物均有较好的改善记忆障碍作用，它们在统计学上无显著性差异，其中水提物的趋势更好。从芍药苷提取率看，水为0.42%，稀醇为0.43%，经t检验，两者在显著性水平α=0.05下，测定结果一致。
　　根据以上对比试验，并考虑到能耗、成本、安全性等方面的因素，最后确定水为提取溶剂。
2.2　挥发油的提取
　　处方中当归、川芎、白术3味药材均含挥发油，考虑到挥发油亦为中药活性成分，为防止水煎过程中挥发性组分的挥散逸失，先以水蒸气蒸馏法收集挥发油。实验结果表明，加水10倍，浸泡1 h，再加热回流提取6 h，挥发油基本提尽，挥发油收率为每1000 g生药1.7 ml左右。
2.3　提取工艺筛选
　　按处方比例，称取各药味(共215 g)。含挥发性成分的3味中药加适量水浸泡，水蒸气蒸馏6 h至挥发油提尽，药液滤过，滤液另器收集。药渣与其余3味，以L₉(3⁴)正交表安排实验。考察因素及水平见表1。