三七中皂苷类成分的液相图谱研究中药指纹图谱 | 39康复网

   摘要：目的：研究三七中皂苷类成分的液相图谱。方法：采用C18色谱柱；乙腈-水为流动相，梯度洗脱，乙腈-水（20:80）保持10min，经30min将乙腈-水变为（33:67），再经20min将乙腈-水变为（60:40）；检测波长为203nm；进样量10ul；流速：1ml/min；柱温25℃。结果：测定了35个三七样品中皂苷类成分的指纹图谱。结论：为三七质量控制新模式的建立提供了依据。
    关键词：HPLC 液相图谱皂苷类成分三七
1 仪器及试药
    HP1100 液相色谱仪，HP1100系列四元泵，VWD可变波长检测器，自动进样器。人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷R1对照品及三七皂苷Rg1对照品均为中国药品生物制品检定所提供；人参皂苷Rd对照品为中国科学院昆明植物研究所提供。
    三七样品：云南省文山州、红河州三七栽培区，云南省药物研究所郑博仁主任药师鉴定。
    所用溶剂均为分析纯，乙腈为色谱纯，水为WELL MATE纯水器制备。
2色谱条件
    Agilent色谱柱（150mm×4.6mm,5um）；乙腈-水为流动相，梯度洗脱：初始，乙腈-水比例为20:80，保持10min；经30min，比例为33:67；再经20min，比例为60:40。检测波长203nm.；进样量10ul；流速：1ml/min；柱温25℃。
3溶液配制
3.1对照品溶液：取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rd及三七皂苷R1各3mg，分别加甲醇5ml溶解作为对照品溶液。
3.2 供试品溶液：取样品粉末1g，加甲醇25ml，加热回流1h，滤过，取滤液蒸干，残渣加甲醇2ml 溶解，转入C18预处理小柱（预先用甲醇5ml洗脱），用甲醇洗脱于5ml量瓶中并稀释至刻度，即得。
4系统适用性试验
    分别量取对照品溶液、供试品溶液注入色谱仪，记录色谱图。理论板数按三七皂苷R1峰计算不低于20000，按人参皂苷Rg1、人参皂苷Re峰计算不低于18000，人参皂苷Rg1与人参皂苷Re 的分离度为1.5，理论板数按人参皂苷Rb1峰计算不低于100000，人参皂苷Rb1与其他峰的分离度> 1.5。
5图谱测定
    取上述溶液各10ul，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。比较后确定了35个样品中均有的15个色谱峰作为共有峰（图1），以样品中人参皂苷Rg1峰为参照，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积（表略）。与三七中5个主要皂苷类成分对照品色谱图比较，以确定样品中的对应峰，2号峰为三七皂苷R1，3号峰为人参皂苷Rg1，4号峰为人参皂苷Re，10号峰为人参皂苷Rb1，11号峰为人参皂苷Rd。同时计算15个共有峰占总皂苷峰面积比例（%）的总和，见表4。
5.1 15个共有峰的相对保留时间有极好的相似性，RSD均小于1%。
5.2 根据各主要成分峰面积占总峰面积的比例，10%以上有2个：人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1。以人参皂苷Rg1峰为参照，则35个三七样品中人参皂苷Rb1的相对峰面积比值的RSD为8.0%。
5.3 同一产地（砚山县）样品中主要成分人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rd及三七皂苷R1
的相对保留峰面积比值的RSD小于10%，有较好的相似性。
5.4 样品1号、2号、3号、24 号、30号为一园七（同一栽培园中同时所产不同规格的三七），人参皂苷Rb1、人参皂苷Re及三七皂苷R1的相对保留峰面积的RSD小于10%，有较好的相似性，而规格间存在一定差异。
5.5样品9号和32号为高海拔（2200m）栽培三七，与其他样品存在较大差异。
5.6 春三七与冬三七其共有峰的相对峰面积比值没有显著性差异。
5.7 三七正常为栽培3年后采收，样品33号、34号为2年生三七，35号为1年生三七，其主要成分比例与3年生样品没有显著性差异，但总含量则明显少得多。
6讨论
6.1三七中的活性成分以多种达玛烷型四环三萜皂苷为主，其根中的主要皂苷成分为人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1，与人参根十分相似，而三七皂苷R1则是三七中的特有成分。
6.2 将测定波长改为254nm，由于皂苷类成分在此波长处无吸收，故出现的吸收峰为非皂苷类成分，确定10min以前和60min以后的吸收峰大多数为非皂苷类成分，保留时间为18.5min的峰也不为皂苷类成分，因此此部分吸收峰未计入共有峰。
6.3 对35个样品在10min至60min范围内吸收峰进行比较，确定了15个共有峰。
6.4色谱分离过程采用梯度洗脱，调整依据为使人参皂苷Rg1与人参皂苷Re的分离度、人参皂苷Rb1与其最近的吸收峰的分离度达到1.5。实验中发现，同一色谱柱放置后再次测定时分离情况会发生改变，需重新调整梯度，以使分离情况相同。

作者： 2006-3-27