固定细胞的PI单染色法

　　方法一

　　1．收集细胞（1～5）×106个，500～1000r/min离心5min，弃去培养液。

　　2．3ml PBS洗一次。

　　3．离心去PBS，加入冰预冷的70％的乙醇固定，4℃，1h。

　　4．离心弃去固定液，3ml PBS重悬5min。

　　5．400目的筛网过滤1次，500～1000r/min离心5min，弃去PBS。

　　6．用1ml PI染液，4℃避光30min。

　　7．流式细胞仪检测：PI用氩离子激发荧光，激发光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光，可分析前散射光对侧散射光的散点图及PI荧光的直方图。

　　方法二

　　1．收集细胞（1×106个），500～1000r/min离心5min，弃去培养液。

　　2．1ml PBS/FCS洗一次。

　　3．500～1000r/min离心5min去PBS/FCS，加入500μl PBS/FCS和500μl的多聚甲醛固定液，轻轻混匀，在4℃下固定4min。

　　4．500～1000r/min离心5min弃去固定液，室温加入含0.2％ Tween的PBS 1ml，37℃孵育15min。

　　5．1ml PBS/FCS洗3次，每次5min。

　　6．400目的筛网过滤1次。

　　7．500～1000r/min离心5min去PBS/FCS，用1.0ml PI染液，4℃避光至少30min。染色在24h之内皆可行，流式细胞仪分析。