丙型肝炎病毒抗体酶标试剂盒的评价

【摘要】　目的　了解国内丙型肝炎病毒抗体酶标诊断试剂盒的质量。方法　应用中国国家丙型肝炎病毒抗体参考品及美国BBI anti-HCV panel对Abbott等四家国外及六家国内丙型肝炎病毒抗体试剂盒进行了评价。结果　198份中国国家丙型肝炎病毒抗体参考品中的100份阳性参考品的检出率，Abbott试剂盒为98％，国产试剂盒为95％～97％。对25份BBI panel中的23份阳性血清，panel检出率Abbott等国外试剂盒为87％～100％，国产试剂盒为70％～91％。结论　国产试剂盒所用丙型肝炎病毒抗原结构区抗原与国外试剂一致，但非结构区抗原较弱。提高国产丙型肝炎病毒抗体试剂盒的质量，应增加高质量的非结构区抗原的应用。

　　Evaluation on the anti-hepatitis C virus enzyme-linked immunosorbent diagnostic kits　Zhou Chen,Qi Zibai,Gu Jinlian,et al.National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products,Beijing　100050

　　Abstract　Ten different anti-HCV ELISA kits,four manufactured from abroad (ABBOTT,lnnogenetics,Murex,Monolisa)and six in China,were evaluated by China national anti-HCV panel(100 positive,98 negative)and Boston Biomedical inc.(BBI)anti-HCV mixted titer performance panel(23 positive and 2 negative).The detective rates in 100 China national anti-HCV positive panel were 98％by ABBOTT eIA 2.0,96％by BHY,SKH and XWK,95％by BBS and HHM,97％by SCJ,and that in 23 BBI anti-HCV positive panel were 100％by ABBOTT EIA2.0,but 91％by Murex,87％by Innogenetics and monolisa,74％by BHY,87％by SKH,83％by XWK and HHM,70％by BBS,91％by SCJ.The specificity for all negative panels were similar in all kits.According to the results of HCV rIBA test (Ortho HCV RIBA 2.0),the structural antigens contained in all kits were almost the same,but the antigenicity of HCV nonstructural proteins were different, in the kits made in China they were lower than that made from abroad.

　　Key words:　Hepatitis C　　Diagnostic kit

　　预防输血后丙型肝炎，诊断试剂是重要手段。1989年美国学者Choo等人获得丙型肝炎病毒抗体诊断结构区克隆，表达后的第一代丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒问世用，用C-100-3作为包被抗原，第二代诊断试剂盒增加了核心区及NS3区抗原。目前新发展的诊断试剂盒则应用更多区段的HCV抗原，试剂盒的灵敏度有明显提高。随着国外丙型肝炎病毒抗原的引进，结合国产丙型肝炎病毒抗原的表达及合成，国产丙型肝炎病毒抗体酶标诊断试剂的质量得到了提高和完善。为了了解国内丙型肝炎病毒抗体酶标诊断试剂盒的质量，我们应用中国国家丙型肝炎病毒抗体诊断试剂参考品和美国Boston biomedical lnc(BBI) Anti-HCV mixed titer performance panel对国内外丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒进行了对比检测。

　　1　材料和方法

　　1.1　材料来源　中国国家丙型肝炎病毒抗体诊断试剂参考品(中国药品生物制品检定所)由198份样品组成，其中丙型肝炎病毒抗体阴性样品98份，阳性样品100份。美国BBI anti-HCV panel,由美国Abbott公司赠送，共25份，其中丙型肝炎病毒抗体阴性样品2份，丙型肝炎病毒抗体阳性样品23份。国产丙型肝炎病毒抗体酶标诊断试剂盒由各省市卫生部门逐批抽样，每批产量在十万人份以上。HCV rIBA试剂盒由美国ORTHO DIAGNOSTIC公司提供。

　　1.2　检测方法　严格按照各厂家试剂盒说明书操作。ORTHO HCV RIBA　2.0试剂盒判断标准：①样品具有两条或两条以上的HCV特异反应蛋白带，为HCV rIBA补充试验阳性，仅有一条阳性带为可疑，不出现反应带为HCV RIBA补充试验阴性。

　　2　结果

　　应用198份中国国家丙型肝炎病毒抗体参考品对Abbott及六家国产试剂盒进行检测，其中100份阳性样品的检出率，Abbott及国产试剂盒BHY， sKH， XWK， BSS， SCJ， HHM分别为97％,96％,96％,96％,95％,97％,95％。对98份阴性样品检测，阴性符合率分别为99％,99％,96％,98％,98％,97％,99％。198份中国国家丙型肝炎病毒抗体参考品检测总符合率分别为98％,97％,96％,97％,96％,97％,97％。见表1。

　　表　1　198份中国国家丙型肝炎病毒抗体参考品检测结果

　　Tab.1　Detection of Anti-HCV by 198 China national anti-HCV panel

	100份阳性 　　100 positive			98份阴性 　　98?negative			总符合率% 　　Total 　　conformity 　　rate%
	+	-	阳性符合率% 　　Positive 　　conformity 　　rate(%)	+	-	阴性符合率% 　　Negative 　　conformity 　　rate%
Abbott 　　2.0	97	3	97	1	97	99	98
BHY	96	4	96	1	97	99	97
SKH	96	4	96	4	94	96	96
XWK	96	4	96	2	96	98	97
BBS	95	5	95	2	96	98	96
SCJ	97	3	97	3	95	97	97
HHM	95	5	95	1	97	99	97

　　七家国内外丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒对中国国家丙型肝炎病毒抗体参考品检测，以Abott丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒灵敏度特异性、总符合率为最好，国产试剂的灵敏度与Abbott试剂盒接近。应用BBI anti-HCV panel对Abbott,lnnogenetics,Murex, Monolisa四家国外丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒及BHY，SKH， XWK， bSS， SCJ， HHM六家国产丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒进行检测，25份BBIAnti-HCVpanel中仅有2份阴性样品，十家试剂盒检测均为阴性，而23份阳性样品的检出率分别为100％,87％,91％,87％,74％,87％,83％,70％,91％,83％。对25份BBI anti-HCV panel检测的总符合率分别为100％,88％,92％,88％,76％,88％,84％,72％,92％,84％。结果见表2。

表　2　25份BBI Anti-HCVpanel 检测结果

　　Tab.2　Detection of Anti-HCV in 25 BBI Anti-HCV panel

	23份阳性 　　23 positive			2份阴性 　　2?negative			总符合率% 　　Total 　　conformity 　　rate%
	+	-	阳性符合率% 　　Positive 　　conformity 　　rate(%)	+	-	阴性符合率% 　　Negative 　　conformity 　　rate%
Abbott 　　2.0	23	0	100	0	2	100	100
Innoge- 　　netics	20	3	87	0	2	100	88
Murex	21	2	91	0	2	100	92
Monolisa	20	3	87	0	2	100	88
BHY	17	6	74	0	2	100	76
SKH	20	3	87	0	2	100	88
XWK	19	4	83	0	2	100	84
BBS	16	7	70	0	2	100	72
SCJ	21	2	91	0	2	100	92
HHM	19	2	83	0	2	100	84

　　十家国内外丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒对25份BBI Anti-HCVpanel检测，以Abbott试剂盒灵敏度最好，另外三家国外试剂及六家国产试剂盒均有不同程度的漏检，与Abbott试剂盒相比有明显差异。对25份BBI anti-HCV panel中的弱阳性血清，用ORTHO公司生产的HCV RIBA　2.0进行检测，其中8份为可疑，该8份血清除用Abbott试剂检测全部为阳性外，其余九家国内外试剂盒检出比，国外试剂盒均为6/8，而BHY，SKH，XWK，BSS，SCJ， hHM国产试剂盒检出比分别为3/8，3/8，5/8，4/8，6/8，5/8。结果见表3。

　　表　3　8份RIBA试剂检测为可疑的Anti-HCV panel各试剂盒检测结果

　　Tab.3　Detection of Anti-HCV in 8 by anti-HCV panel which were indeterminate by RIBA

	C22-3(Core)		C33c(NS3)		C5-1-1, 　　C100-3(NS4)		Positive 　　rate
	+	-	+	-	+	-
Abbott 　　2.0	5	0	2	0	1	0	8/8
Innogenetics	4	1	2	0	0	1	6/8
Murex	5	0	1	1	0	1	6/8
Monolisa	4	1	2	0	0	1	6/8
BHY	3	2	0	2	0	1	3/8
SKH	5	0	0	2	0	1	3/8
XWK	5	0	0	2	0	1	5/8
BBS	3	2	1	1	0	1	4/8
SCJ	5	0	1	1	0	1	6/8
HHM	5	0	0	2	0	1	5/8

　　3　讨论

　　大量的研究认为，输入带有HCV的血液或血液制品是丙型肝炎病毒感染的主要途径^［1］，故近几年来对献血员进行抗-HCV常规筛选。国外报道，采用献血员抗-HCV常规筛选后，输血后丙型肝炎的发生率减少了50％～70％^［2，3］，但仍存在部分受血者发生输血后丙型肝炎，其主要原因是检测方法不够完善。目前采用常规的ELISA检测丙型肝炎病毒抗体，丙型肝炎病毒抗原是影响丙型肝炎病毒抗体试剂盒的主要因素，各试剂盒所采用的丙型肝炎病毒抗原不一，包括基因工程表达抗原和人工合成多肽抗原。Abbott公司采用基因工程表达抗原，美国UBI公司采用人工合成多肽抗原，国内生产单位多采用基因工程抗原和人工合成多肽抗原混合使用。从上述结果可以看出，采用基因工程抗原所生产的试剂灵敏度高于人工合成多肽抗原所生产的试剂盒。表3数据说明，国内外丙型肝炎病毒抗体试剂盒所采用的核心区抗原其抗原性基本一致，所存在的差别在于非结构区抗原，多肽合成的非结构区抗原及国内试剂盒所采用的基因工程非结构区抗原，其抗原性明显弱于Abbott公司试剂盒所应用的非结构区抗原。

　　值得注意的是，从我们的检测结果看，国产丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒的质量与Abbott公司的试剂会还存在一定的差距。根据我们的经验，以下两个问题可能是影响国产试剂盒的主要因素：①抗原质量，特别是非结构区抗原，其抗原性明显弱于Abbott试剂盒所使用的抗原，应加强丙型肝炎病毒非结构区抗原的研制及应用。②优化试剂盒的组装及检测步聚，试剂盒生产的GMP管理及严格检测程序直接影响到试剂盒的质量，国产试剂盒过分追求操作简便，将抗原抗体反应时间明显缩短，并且显色时间为Abbott试剂盒的三分之一。这样，国产试剂盒的阴阳性样品A值之差明显小于Abbott试剂盒，既容易造成漏检又容易产生假阳性结果，特别是对弱阳性样品检测的重复性差。

　　目前，对献血员进行丙型肝炎病毒抗体筛选的首选方法仍然是ELISA，提高丙型肝炎病毒抗体试剂盒的质量当务之急是开发更好的丙型肝炎病毒抗原，特别是非结构区抗原，将丙型肝炎病毒抗体试剂盒进一步完善。

参　考　文　献

　　1　KiyosawaK,Gibol Y,Sodeyana T,et al. Possible infectious causes in 651 patients with acute viral hepatitis during a 10-year period.Liver,1987,7:163-167.

　　2　Alter H J,Colemont P J, Alexander W T,et al.Transfusion-transmitted viral disease.Arlington,AV:American Association of Blood Banks,1987:53-56.

　　3　Alter H J,Hander S C,Judson P N,et al.Clinical and serological analysis of transfusion-associate hepatitis.Lancet,1975,2:838-841.