蜂毒的免疫调节机制研究

蜂毒的免疫调节机制研究

中国免疫学杂志 2000年第10期第16卷 中医中药与免疫

作者：王秋波　鲁迎年　臧云娟　张艳丽

单位：王秋波（青岛大学医学院免疫学教研室，青岛266021）；鲁迎年（青岛大学医学院免疫学教研室，青岛266021）；臧云娟（青岛大学医学院免疫学教研室，青岛266021）；张艳丽（青岛大学医学院免疫学教研室，青岛266021）

关键词：蜂毒；TH1；TH2；细胞因子

　　摘　要　目的：探讨蜂毒对免疫系统的调节作用。方法：对健康志愿者蜂毒螯刺，分别于螯刺前后检测血浆及单个核细胞(PBMC)经PHA诱导产生的IL-2/IL-4，以及IgG、IgA、IgM、C3，反映机体细胞免疫及体液免疫功能变化。结果：蜂疗后机体血浆及诱导PBMC产生的IL-2含量明显增高，血浆IL-4含量明显降低，诱生PBMC产生的IL-4无明显变化，同时血浆中的IgG、IgA、IgM、C3的量在蜂疗前后无明显变化。结论：蜂毒对机体免疫系统有直接作用，蜂毒通过增强TH1细胞功能，对机体细胞免疫功能起正向调节作用。

　　中国图书分类号　R730.52

Study on the immune-regulating mechanism of the bee venom

WANG Qiu-Bo，LU Ying-Nian，ZANG Yun-Juan

　　（Department of Immunology,Qingdao University Medical College,Qingdao 266021）

　　Abstract　Objective:To study the regulatory effect of the honey bee venom on the immune system.Methods:The level of IL-2、IL-4、IgG、IgA、IgM、IgE and C3 in their plasma and supernatant of PBMC induced with PHA were detected before and after stinguishing to volunteers.Results:After stinging,the level of IL-2 in both plasma and induced PBMC rised significanly,the level of IL-4 in plasma marked reducded,however,the level of IL-4 in induced PBMC as well as IgG、IgA、IgM and C3 has no distinct changes Conclusion:The Bee venom have a direct effect on the human immune system.Bee venom can regulate the immune system by enhancing the function of body's cellular immunity

　　Key words　Bee venom　TH1　TH2　Cytokines

　　蜂针疗法作为一种民间疗法在我国流传已久，已广泛应用于风湿、类风湿、过敏性哮喘、神经痛等疾病治疗，取得了可靠的临床疗效，但对其作用机制知之甚少。蜂毒成分复杂，含有多种肽、酶类、生物胺，人们对蜂毒的认识多限于对神经、血液、结缔组织的直接作用，而蜂毒所治疗的疾病中80%属于免疫性疾病^［1，2］。本研究从免疫学角度，探讨蜂针螯刺前后对机体的免疫功能影响及蜂针疗法对免疫系统的调节作用。

　　1　材料与方法

　　1.1　病例选择及治疗方法　健康志愿者16例，其中男7例，女9例，年龄20～45岁。螯刺方案：穴位免疫疗法防治过敏性哮喘的治疗方案^［1］，取穴部位：足三里、跗阳交替使用，每次两针，1次/w，连续5 w为一疗程。

　　1.2　方法

　　1.2.1　标本的制备　单个核细胞(PBMC)诱生IL-2、IL-4，无菌抽血4 ml，EDTA抗凝，分离血浆，-20℃保存备用。剩余血细胞按常规方法以Ficoll分层液分离单个核细胞，用含10%小牛血清的PRMI1640培养液调整细胞浓度为1×10⁵～2×10⁵，取2 ml置24孔细胞培养板，内加终浓度为50 μg/ml PHA。37℃5%CO₂培养72 h。取上清置-20℃待测。

　　1.2.2　血浆PBMC中IL-2、IL-4的检测　IL-2、IL-4检测试剂盒在美国Eyzma公司产品，采用ELISA方法，按说明书操作。

　　1.2.3　IgE检测　MBI公司产品，按说明书操作。

　　1.2.4　IgG、IgA、IgM的检测　北京科兴生物公司产品，采用单扩散法测定。

　　1.3　统计学方法　采用配对t检验，采用POMS软件包处理。

　　2　结果

　　2.1　蜂疗前后血浆及PHA诱生PBMC中的IL-2、IL-4比较　16例接受蜂疗个体中，13例在蜂疗后血浆IL-2明显增高，其蜂疗前血浆IL-2的平均值277.3 pg/ml，蜂疗后血浆IL-2平均值为980 pg/ml，蜂疗前后有极显著差异(t＝3.598，P＜0.01)，11例蜂疗后血浆IL-4明显降低，蜂疗前血浆IL-4的平均值63.4 pg/ml，蜂疗后其平均值32.9 pg/ml，平均降低31.4 pg/ml，显示出极显著差异(t=2.979，P＜0.01)，见表1。12例蜂疗后较蜂疗前经PBMC诱导产生的IL-2明显升高，蜂疗前经PBMC诱导产生的IL-2平均值67.7 pg/ml，蜂疗后经PBMC诱导产生的IL-2平均值625.9 pg/ml，平均升高558.2 pg/ml(t=2.63，P＜0.05)，而PBMC诱导产生的IL-4蜂疗前后无变化(t=0.561，P＞0.05)，见表2。

表1　蜂疗前后血浆中IL-2/IL-4水平分析

　　Tab.1　Level of plasma IL-2/IL-4 in subjects before and after VIT VIT:(venom immunotherapy)

Subject	Before VIT		After VIT
	IL-2(pg/ml)	IL-4(pg/ml)	IL-2(pg/ml)	IL-4(pg/ml)
1	84.2	18.6	2 164.2	20.4
2	96.4	20.4	1 774.4	20.4
3	38.1	98.6	1 554.4	18.6
4	801.7	16.9	801.6	17.5
5	615.1	18.6	1 274.3	18.6
6	53.9	40.2	1 236.4	38.0
7	42.7	42.5	95.3	10.7
8	58.5	87.2	143.1	82.4
9	58.5	72.0	149.4	18.6
10	76.5	32.2	326.7	40.2
11	58.5	36.0	37.2	34.0
12	98.2	40.3	807.6	26.0
13	113.0	96.0	477.0	52.7
14	301.7	88.5	1 217.9	23.3
15	85.0	69.0	85.0	23.3
16	516.4	31.0	721.9	29.0
	193.7±237.7	50.2±29.8	864.1±716.1	30.2±16.4

表2　蜂疗前后PHA诱导PBMC产生的IL-2/IL-4水平分析

　　Tab.2　Level of PBMC IL-2/IL-4 induced with PHA in subjects before and after VIT (venom immunotherapy)

Subject	before VIT		after VIT
	IL-2(pg/ml)	IL-4(pg/ml)	IL-2(pg/ml)	IL-4(pg/ml)
1	56.8	28.4	202.9	23.5
2	46.5	20.4	256.1	19.5
3	64.8	21.2	2 165.3	22.4
4	69.2	19.5	441.7	19.5
5	84.4	18.6	563.2	43.2
6	74.7	53.0	2 274.1	42.5
7	53.9	56.0	256.1	74.1
8	84.4	44.9	356.7	59.2
9	63.5	56.2	95.3	39.3
10	53.9	44.9	52.4	60.1
11	58.5	59.2	50.1	44.9
12	76.3	27.3	321.1	28.7
13	57.6	56.6	703.4	34.6
14	79.7	61.2	399.2	75.3
15	55.3	47.8	50.6	58.6
16	68.4	38.5	103.1	44.1
	65.5±11.6	40.9±15.9	518.1±872.7	41.2±20.7

表3　蜂疗前后血清中Ig和C3的水平分析(n=16)

　　Fig.3　Level of serum Ig and C3 in subjects befor and after VIT (n=16)

	Before VIT	After VIT	Statistical significance
IgE(μg/L)	996.9±1 017.8	832.5±602.2	P＞0.05
IgG(g/L)	9.5±5.6	16.8±28	P＞0.05
IgM(g/L)	1.3±0.3	1.4±0.6	P＞0.05
IgA(g/L)	1.17±0.42	1.43±0.50	P＞0.05
C3(g/L)	1.17±0.76	1.12±0.40	P＞0.05

　　3　讨论　　以往人们对蜂毒研究多局限于对神经、血液、心血管等系统的直接作用而产生抗菌、抗炎、抗凝血、抗高脂、抗辐射等多种生物学效能，近年来发现蜂毒中的多肽类物质可能在机体的免疫调节中起作用，可通过刺激垂体-肾上腺系统的功能，使血液循环中的皮质醇激素含量明显而持久增高，从而间接地影响机体免疫功能^［3］。

　　辅助性T细胞(Th)对机体体液免疫和细胞免疫有重要调节作用。1986年，Mosmann发现，CD4⁺细胞具有两种功能不同的亚群，分别称为Th1和TH2细胞^［4］。Th1细胞分泌IL-2、IFN-γ、INF-8等，促进细胞免疫应答：Th2分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13等。主要介导体液免疫应答。体内细胞免疫与体液免疫保持相对平衡，可能通过TH1、TH2细胞比值变化进行调节。目前，许多研究表明，自身免疫病、AIDS、肿瘤及正常妊娠都与TH1型/TH2型细胞及其因子有关^［5，6］。蜂毒中的多肽类物质可调节Th1和Th2细胞在机体免疫应答过程中的比例。

　　本研究分别以IL-2、IL-4的量代表Th1、Th2类细胞的数量及功能状况，于蜂疗前后检测血浆、PBMC诱生的IL-2/IL-4，以及免疫球蛋白含量，从而研究蜂毒对机体免疫功能的影响。结果显示，蜂毒对免疫系统有直接作用，蜂疗后机体血浆及PBMC的IL-2含量明显增高，导致Th1细胞功能升高，而蜂疗后IL-4降低，另外IgG、IgA蜂疗后含量升高，但无统计学意义。说明蜂毒对机体免疫系统的作用，主要通过增强机体细胞免疫功能，对体液免疫功能需增加实验例数，再行分析。这一结果与Bellinghausen和Jutel报道相符，他们的试验也证明了发现蜂毒疗法可促使机体出现Th2向Th1漂移的现象^［7，8］。

　　现已证明，类风湿性关节炎、SLE、过敏性哮喘等病人均表现Th2类细胞功能增强，Th1类细胞降低^［7］ 。而上述疾病恰属蜂针疗法的适应症，其治疗机制除蜂毒对心血管、神经、血液系统直接作用外，可能通过Th1类细胞，增强机体细胞免疫功能，因此，利用蜂毒对免疫系统的免疫调节作用，开展蜂毒治疗细胞免疫功能低下、肿瘤以及病毒感染等疾病的研究具有重要意义。

　　作者简介：王秋波，女，实验师，主要从事医学免疫和分子生物学实验研究

　　参考文献

　　1，李安生.足三里穴位免疫疗法防治过敏性哮喘的临床研究.实用中西医结合杂志，1997；19(10)：1858

　　2，王金庸.中医蜂疗学.沈阳：沈阳出版社，1997：513

　　3，Bellinghausen I,Metz G,Enk A H et al.Insect venom immunotherapy induces interleukin 10 production and a Th2-to-Th1 shift,and changes suface marker expression in venom-allergic subjects.Eur J Immunol，1997;27:1131

　　4，Mosmann T R. Cytokine patterns during the progression to AIDS.Science，1994;265:193

　　5，Huang M,Wang J,Lee P et al.Human non-small cell lung cancer cells express a type 2 cytoine pattern.Cancer Res，1995;55:3847

　　6，Janadi M,Ball A L,Dalaan A L et al.Cytokin profile in systemic lupus erygthematosus,rheumatoid arthritis and other rheumatic diseases.J Clin Immunol,1993;13(1)：58

　　7，Jutel M,Pichler W J,Skrbic D et al.Bee venom immunotherapy resluts in decrease of Il-4 and Il-5 and increase of IFN-gamma secretion in specific allergen-stimulated T cell cultures.J Immunol，1995;154:4187

　　8，Timthy R M,Cherwinski H,Marthaw I et al.Two types of murine helper Tcell clone.J Immunol，1986;137(7):2384

［收稿1999-12-03，修回2000-03-31］