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[摘要] 目的:应用酶联免疫法分别检测丙肝病毒核心抗原(HCV-cAg)和抗体(HCV-Ab) ,了解丙肝病毒核心抗原检测的意义。方法:采用军事医学科学院基础医学研究所研发并由湖南景达基因公司推出的商业化的HCV游离核心抗原试剂盒,对来自入院前或手术前筛查的180例临床样本和24例丙肝或疑似丙肝患者的血清样本进行HCV-cAg和HCV-Ab检测,阳性者用反转录多聚酶链反应(RT-RNA)证实。结果: 180例筛查样本HCV-Ab均为阴性, HCV-cAg阳性2例,其中RT-RNA阳性1例; 24例HCV-Ab阳性的样本检出HCV-cAg阳性12例, RT-RNA阳性14例。HCV-cAg与RT-RNA符合率为85171% (12 /14) 。结论: HCV核心抗原检出时间早于抗体, HCV-cAg检测试剂盒可作为HCV抗体检测的补充试剂。
[关键词] 丙肝病毒抗体; 丙肝病毒核心抗原; 反转录多聚酶链反应
[中图分类号] R37312 [文献标识码] A [文章编号] 1004 - 8685 (2007) 04 - 0624 – 02
Compar ison and study on core an tigen s and an tibod ies respon se to hepa titis C v irus
Suo Feng2shuang, L i Ping2yan, Kang X i2x iong
(Laboratory Diagnosis Center, Beijing Tiantan Hosp ital, Beijing 100050, China)
[ Abstract] Objection: To investigate the significance of detection of core antigen to hepatitis c virus by using the internal re2gent EIA and Anti - HCV1Methods: The enzyme immunoassay kits for HCV - cAg developed by academy ofmilitarymedical sci2ence and Hunan J ingda Gene Co1L td1were used in this study1The 180 clinical samp les of negative and 24 of positive with anti -HCV were tested with HCV - cAg EIA kits and results were compared with HCVRNAtests1Results: In 180 clinical samp les ofnegative and 24 of positive, positive rateswere 111% (2 /180) and 50% (12 /24) , the HCV - RNA were 0155% (1 /180) and58133% (14 /24) , respectively1Compared with HCV - cAg and RT - RNA, the coincidental rate was 85171% ( 12 /14). Con2clusion:HCV core antigen can be detected in patients with hepatitis p rior to antibody p roduction1HCV core antigen EIA may bethe additional detection of anti - HCV with certain clinical value.
[ Key words] Anti - HCV; HCV - cAg; RT - RNA
丙肝是严重威胁人类健康的传染病之一,主要通过血液传播。据统计全球已有117亿人受到感染,我国的丙肝感染率大约为312% ,而多数HCV感染都是无症状性的,少数引起急性肝炎的患者,其症状也比甲型和乙型急性肝炎的症状轻。不幸的是,感染丙肝病毒后形成慢性感染的机率很高,且有相当比例患者会发展成肝硬化、肝癌。为此,较早检出丙肝病毒感染,及时有效的阻断HCV的传播是非常重要的。本研究应用湖南景达基因公司的商业化HCV游离核心抗原试剂,对入院前或手术前进行病毒筛查的患者及肝炎门诊的部分患者共计204例,进行HCV-cAg、HCV-Ab检测并用RT - RNA证实,以观察游离核心抗原试剂在监测丙肝病毒感染上的有效性。
1 材料与方法
1.1 研究对象
1.1.1 肝炎门诊标本来自2005年1月至12月经HCV抗体检测阳性的血液标本24 例,分离血清并置- 70℃冰箱保存。
1.1.2 门诊病人标本来自2005年12月入院前或手术前进行病毒筛查的血液标本,随机抽取180例,这部分病例采用双盲法同时检测HCV-Ab和HCV-cAg。
1.2 方法与试剂
1.2.1 HCV-Ab检测采用北京万泰生物公司生产的HCV-Ab ELISA试剂盒,按说明书上的方法操作,阳性结果经二次复检。
1.2.2 HCV-cAg检测采用湖南景达基因公司商业化的HCV-cAg ELISA试剂盒,按说明书上的方法操作,阳性结果经二次复检。
1.2.3 HCV-RNA检测采用华美生物工程公司生产的丙肝病毒PCR检测试剂盒,按说明书上的方法操作。
2 结果
180例未知样本HCV-Ab检测均为阴性, HCV-cAg阳性2例,占1.1% ,其中RT-RNA 阳性1例; 24例肝炎门诊HCV-Ab阳性的样本检出HCV-cAg阳性12例, RT-RNA6244阳性14例, HCV-cAg与RT-RNA 符合率为85.71% ( 12 /14) ,见表1。
表 1 HCV-Ab、HCV-cAg、RT-RNA检测结果(例)
结果 HCV-cAg( + ) HCV-cAg( - ) RT-RNA( + ) RT-RNA( - ) RT-RNA( + ) RT-RNA( - ) 未做RT-RNA HCV-Ab ( + ) 12 2 10 HCV-Ab ( - ) 1 1 178 总计 13 1 2 10 178
3 讨论
HCV感染通常是持续性的终生感染,抗体检测是一个非常有效的方法。但因感染HCV后,抗HCV出现较慢,一般情况下,抗体的血清学转换可以延迟到暴露后几个月才发生[ 1 ] ,此时可发生抗HCV的假阴性(也就是说在抗体可检出之前或在血清学转换之中即所谓的“窗口期”) ,故在早期诊断丙肝感染上有困难。本研究180例HCV-Ab检测阴性的临床样本中,检出HCV-cAg阳性2例,经HCV-RNA确认其中有1例阳性。表明“窗口期”的患者因测不出HCV - Ab易被漏诊。
反转录多聚酶链反应(RT-PCR)是一个很敏感的方法。HCV-RNA可以在暴露后的1～2周被检出[ 2 ]。另外,在一些HCV感染后恢复期的人群中,抗HCV可能会逐渐降低到检测限之下[ 3 ] ,或免疫功能低下的HCV感染者,抗HCV会持续阴性,这时, HCV-RNA的检测是感染的唯一证据。故使用RT-PCR技术检测HCV-RNA是判断感染最有效的方法。但其技术复杂,环境、条件要求较高,不易被多数实验室接受和推广。HCV核心抗原是HCV感染者体内出现的早期感染标志,几乎与HCV RNA同时出现。湖南景达基因公司采用单克隆抗体制备的EIA试剂加之对样本稀释液的改进,使待检血清中HCV病毒外壳破坏,核心抗原充分暴露,保证抗原抗体能充分接触反应,提高了检测的敏感性。有报道, HCV-cAg检测可以较HCV抗体检出时间提早23～46 d[ 4 ] ,且EIA法较PCR法简便、快速,现有能开展ELISA检测的实验室无需增加特殊设备,均可检测。其结果,在被测的24例丙肝样本中HCV-cAg阳性12 例, HCV-RNA 阳性14 例, 符合率为85.71%(12 /14) [ 5 ]。因此,在不具备RNA 检测条件的实验室开展HCV-cAg检测是很好的筛查方法。
24例HCV Ab阳性仅检出12例HCV-cAg阳性, HCV-cAg检出率低的原因,可能是由于有抗体的存在,干扰了抗原的检测或样本中的HCV抗体可能与用于核心抗原检测的单克隆抗体竞争结合抗原而造成HCV-cAg的假阴性,为避免这种干扰,需对单克隆抗体作进一步筛选或作丙肝核心总抗原检测。
180例HCV-Ab阴性中,检出HCV-cAg阳性2例, PCR阳性1例。表明仅用HCV-Ab检测将有可能存在0.55% 感染者漏诊的风险,就这0.55% 也是不容忽视的,尤其是对手术前丙肝病毒筛查的病例,它涉及到术中感染责任和用血安全等问题,丙肝核心抗原检测在一定程度上降低了这些风险。因此,认为HCV核心抗原检测可作为HCV抗体检测的补充试剂。
[参考文献]
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