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【摘要】 目的 了解不同人群输血传播病毒(TTV)的感染状况。方法 采用套式PCR法检测血清标本中TTV DNA，并对其中1株TTV的部分基因序列进行了测定。结果 不同人群TTV DNA阳性率分别为：正常体检人群10.3%，献血员43.7%，吸毒者15.6%，血液透析病人54.4%，妓女65.0%，慢性丙型肝炎病人25.0%，非甲～庚型肝炎0/11。结论 TTV在各类人群中均有较高的感染率。
Detection of transfusion transmitted virus (TTV) in different populations of China
LING Binhua,ZHUANG Hui,LI Kui,et al.
Department of Microbiology, Beijing Medical University,Beijing 100083
【Abstract】 Objective To investigate the prevalence of transfusion transmitted virus (TTV) in different populations of China. Methods TTV DNA was detected in sera collected from different populations by nested PCR. Partial gene of a TTV isolate was directly sequenced. Results The prevalences of TTV in various populations were as follows: 10.3% (31/301) in general population when receiving physical checkup; 43.7% (14/32) in blood donors; 15.6% (5/32) in intravenous drug addicts; 54.4% (6/11) in hemodialysis patients; 65% (13/32) in prostitutes; 25% (4/16) in patients with chronic hepatitis C. None of the 11 patients with non A-G hepatitis was detected TTV DNA. Conclusion High prevalence of TTV infection was found in different populations of China.
【Key words】 Transfusion transmitted virus (TTV) Polymerase chain reaction (PCR) Non A-E hepatitis virus
椐国内外报道，在急性散发性病毒性肝炎中约10%～20%为非甲～戊型肝炎，其中能检测到庚型肝炎病毒(HGV)者仅占2%～20%［1，2］，且HGV的致病性尚有争议，提示存在新型肝炎病毒的可能性。1997年底，日本学者［3］应用代表性差异分析法(Representative Differentiation Analysis.RDA)从1名输血后非甲～戊型肝炎病人中分离到1种新病毒，称为输血传播病毒(TTV)。据报道［4］，该病毒感染与血清丙氨酸转氨酶(ALT)异常有关，且在各型肝炎病人中均有较高的感染率。为了解我国人群TTV感染状况，我们应用套式聚合酶链反应法(nPCR)，对不同地区不同人群进行了TTV DNA检测，并对其中1株TTV DNA部分基因序列进行了测定。现将结果报告如下。
对象与方法
一、研究对象：献血员、血液透析患者、吸毒者、妓女的血清标本采自深圳、安徽、云南、青岛；常规体检人群、慢性丙型肝炎病人以及非甲～庚型肝炎患者血清标本采自北京。所有血清标本均直接送到北京医科大学微生物学系，置－20℃下保存备检。
二、检测方法：酶联免疫法(EIA)检测甲～庚型肝炎病毒的血清学指标；套式逆转录聚合酶链反应法(RT-nPCR)检测HGV RNA。TTV DNA 检测参照日本报道的TTV序列引物，采用套式PCR法(nPCR)，外引物为P1：5′-gcagcagcatatggatatgt-3′，P2：5′-tgactgtgctaaagcctcta-3′；内引物为P3：5′-catacacatgaatgccaggc-3′，P4：5′-gtacttcttgctggt
gaaat-3′。TTV DNA提取采用SDS-蛋白酶K裂解法。第一轮和第二轮的PCR循环参数为94℃，30秒；55℃，30秒；72℃，50秒，终末延伸5分钟，两轮均为30个循环。扩增产物经溴化乙锭染色，2%琼脂糖凝胶电泳，然后在紫外灯下观察鉴定。每次PCR均设阴性、阳性和空白对照。
三、PCR产物序列测定：扩增产物经0.7%低熔点琼脂糖凝胶电泳分离，切下目的DNA条带，用原平公司纯化试剂盒进行回收纯化，采用双脱氧链末端终止法直接测序，测序试剂盒购自Promega公司，测序仪为Bio-Rad公司产品。