Shh基因在肝细胞癌中的表达及意义

【摘要】  目的 探讨sonic hedgehog（Shh）基因在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床意义。方法 采用组织芯片技术和免疫组化(ABCHRP)法对150例HCC手术切除标本进行Shh检测，评估Shh的表达与HCC临床病理的关系。结果 150例肝癌组织，脱片9例，139例中39例有高表达（26.6%）；25例癌旁肝组织无脱片，阳性表达3例（12.0%）；二者比较有显著性差异（P＜0.05）。Shh阳性表达与HCC的转移、淋巴浸润、包膜形成及细胞分化密切相关（P＜0.05）。结论 Shh检测对判断HCC的转移、复发及预后具有意义。

【关键词】  肝肿瘤 Sonic hedghog基因

     Expression and clinical significance of Shh in metastasis of human hepatocellular carcinoma

    LIU Yunjian  LIU Jiao  Chen Qiangpu  et al

    Department of Hepatobiliary Surgery,Affiliated Hospital of Binzhou Medical University,Binzhou 256603

    【Abstract】  Objective  To investigate the effect of sonic hedgehog gene on the invasion,metastasis and prognosis of hepatocellular carcinoma(HCC).Methods  Immunohistochemistry and tissue marray technique were used to evaluate the expression of sonic hedgehog gene, and the relationship between its expression and the clinicopathological prognostic parameters was analyzed in 150 HCC. Results  The results showed that the positive expression rate of patched gene in HCC tissue (n=139) was 26.6%,but that in normal liver tissue was 12.0%. The expression was significantly higher in HCC than that in normal liver tissue. The positive rate of Shh gene was correlated with lymph node invasion, capsule,metastasis (intra or extrahepatic metastasis) and pathological stage.Conclusion  These results suggest that Shh gene may play important roles in the invasion, metastasis and prognosis of HCC.

    【Key words】  hepatic tumor，sonic hedgehog gene

    Sonic hedgehog（Shh）基因与肿瘤的发生和发展关系密切。我们采用组织芯片技术和免疫组化（ABCHRP）法对150例肝细胞癌（HCC）手术切除标本进行检测，研究Shh基因表达与HCC临床病理的关系，旨在探讨其在HCC的转移、复发及预后判断中的作用，现报告如下。

    1  材料与方法

    1.1  材料  标本来自本院1993—1997年手术切除的HCC 150例，肝癌癌旁组织25例为对照，患者术前未行放疗、化疗。标本在甲醛中浸泡8～12 h后石蜡包埋。150例中，脱片11例；参检的139例中，男115例，女24例；年龄24～77岁。有肝外转移者占29.8%(42/139)，有淋巴结转移者占10.6%（15/139）。对照组25例组织取自肿瘤边缘外部位，并经HE染色，病理切片证实无癌变。

    1.2  组织微阵列制备  蜡块用组织芯片仪（MD）制作。150例肿瘤组织和25例癌旁组织每例放入两孔，孔直径0.6 mm。制作芯片时参考HE染色玻片，选择最有代表性区域取组织。小心切片（厚约6 μm）固定在显微镜的玻片上。HE染色的组织芯片供形态学参考。

    1.3  免疫组化  石蜡包埋的组织芯片经脱蜡，0.3%H2O2 10 min阻断内源性过氧化酶活性。微波炉抗原热修复处理（700 W×20 min）。山羊血清封闭非特异性抗原，滴加一抗4℃过夜，然后滴加生物素化羊抗鼠/兔IgG，37℃孵育30 min。DAB显色后，苏木素复染细胞核，脱水树胶封固。每项试验都有阴性对照（缺少一抗）。

    1.4  结果判定  光镜下以细胞质（膜）呈棕黄色为阳性。每例组织芯片随机观察10个高倍（HPFs×400）视野，胞质（膜）呈棕黄色细胞数＜10%为0，10%～30%为1，31%～50%为2，＞50%为3。对照组Shh染色程度1为正常。

    1.5  统计学方法  采用Fisher精确计算法或χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

    2  结果

    2.1  Shh在肝细胞癌中的表达  139例HCC中，39例阳性表达；25例癌旁组织中，3例(12%)阳性表达。两者比较，有显著性差异（P＜0.05）。

    2.2  Shh表达水平和HCC临床病理特征的关系  见表1。Shh阳性表达率与HCC的淋巴浸润、转移、包膜形成、肿瘤分化明显相关（分别为P=0.002，P=0.012，P=0.031），而与性别、年龄、肿瘤大小及肿瘤分期无明显关系。表1  Shh表达水平与HCC临床病理特征的关系注：同一病理特征内比较，*P＜0.05

    3  讨论

    Sonic hedgehog（Shh）信号通道由Shh配体、2个跨膜蛋白受体Patched（Ptc）和Smoothened（Smo）组成的复合物以及转录因子Gli蛋白等组成，在胚胎发育过程中对细胞的增殖和分化意义重大，通路的功能异常会引起肿瘤发生。Shh是Shh通路中的起始基因。Patild等［１］的研究表明，Gli1和Smo在肝癌中的表达较正常肝组织高，认为Shh信号通路在某些肝癌组织中有异常活动，可以作为肝癌治疗的新靶标。Sicklick等［２］研究发现，Shh信号通路在肝癌中活动失调，Smo介导癌基因cmyc过表达在肝癌的发生、发展中发挥关键作用，认为Smo是预测HCC的预后指标。我们的研究发现，HCC中Shh的阳性表达与癌旁组织有显著性差异，而在性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤分期方面无差异。此表明Shh在HCC的发生、发展中起有重要作用，提示在HCC中Shh与侵袭转移相关。我们认为，Shh不仅可以作为HCC诊断和评价预后的指标，而且可以成为HCC生物治疗的靶标之一。

    组织芯片技术对于疾病的分子学诊断、预后指标的筛选、治疗靶点的定位及治疗效果的预测等均有重大使用价值。此技术不仅取材少，获取信息量大，而且最大限度地减少了系统误差。参  考  文  献

【参考文献】
  ［1］ Patild MA, Zhang J, Ho C, et al. Hedgehog signaling in human hepatocellular carcinoma［J］. Cancer Bile Ther, 2006,5(1):111117.

［2］ Sicklick JK, Li YX, Jayaraman A, et al. Dysregulation of the Hedgehog pathway in human hepatocarcinogenesis［J］. Carcinogenesis, 2006,27(4):748757.

作者单位：中山大学附属第一医院肝胆外科