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摘要:目的 探讨多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统（简称C-12）对肿瘤筛查和常见的10种肿瘤检出的优势。并观察其对非肿瘤患者及健康人的灵敏度及特异性。 方法 用肿瘤标志物蛋白芯片检测系统测定4000例健康体检人群、2000例恶性肿瘤甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、神经元特异性稀纯化酶（NSE）、糖原199（CA199）、糖原242（CA242）、糖原125（CA125）、糖原153（CA153）、前列腺特异性抗原（PSA）、游离前列腺特异性抗原（f-PSA）、铁蛋白（FER）、人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）、生长激素（HGH）等12种常见肿瘤标志物的检出情况，分析评价其相关的各种最佳组合。 结果 C-12对相关10种恶性肿瘤检出的灵敏度高于肿瘤标志物单项指标，对健康人检测的特异性为95.9%，对体检人员肿瘤的检出率为0.29%。 结论 联合检测对肿瘤的检出率高于单指标检测，在健康人群中对肿瘤有较高的筛查率。
关键词:肿瘤标志物;蛋白芯片;联合检测
Application of multi-tumor markers protein chip assistance diagnostic system for detection of various tumor.
YUDa-yang.（Laboratory of Check-up Center of Astraunot Navigation General Hospital，Beijing100076，P.R.China）
Abstract:Objective To investigate the advatages of multi-tumor marker protein chip assistance diagnostic systemfor screening over10kinds of cancers and the its specificity and sensitivity in detection of non-cancer subjects and healthy persons. Methods The12tu-mor markers（AFP，CEA，NSE，CA125，CA153，CA242，CA199，PSA，f-PSA，FER，β-HCG，and HGH）in the sera of4000healthy persons and2000patients with benign tumor of inflammation were detected by using the multi-tumor marker protein chip assistance diag-nostic system. Results The sensitivity of the multi-tumor marker protein chip assistance diagnostic systemwas higher in detection of the12tumor markers than that in detection of a single tumor marker and its specificity in detection of healthy persons was95.9%.and the tumor-detecting rate during health check-up was0.29%. Conclusion The tumor detecting rate of the multi-tumor marker protein chip assistance diagnostic system in joint detection is higher than that of single detection in addition to a relatively higher possessing rate in screening healthy persons.
Key words:Tumor markers;Protein chip;Detection
肿瘤标志物应用于临床肿瘤检测已有多年。单项指标主要以酶免、放免和发光等技术进行单指数检测，使用时存在血清用量大、患者费用高、灵敏度低、特异性差等缺点。故近些年出现了用几种肿瘤标志物对某一肿瘤联合检测，来提高肿瘤的检出率。
多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统（以下简称C-12）是基于免疫学和生物信号集成的原理，利用微点阵技术将AFP、CEA、CA125、CA153、NSE、CA199、CA242、PSA、f-PSA、β-HCG、Ferritin和HGH等生物体内的微量肿瘤标志物蛋白进行捕获，使一些传统的生物学分析手段能在极小的空间范围内，以极快的速度完成。同时该系统能够采用高度灵敏的示踪技术将生物信号转化为光、电信号，并以相关的检测设备和计算机软件对这此信号进行快速摄取和即时分析。
本文对不同种类肿瘤的标志物进行分类、统计、组 合。目的是在选取最佳的组合检测指标上进行初步临床 探索。
1 材料和方法
1.1 检测对象 4000例健康人群，2000例有明确病理诊断的癌症患者（包括:肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、食道癌、胰腺癌、乳腺癌、子宫癌、前列腺癌、卵巢癌共10种常见癌症），其中男性1356，女性644，年龄13～79岁。其中部分病人经过治疗，健康体检人员和癌症病人的检测结果来自上海数康生物科技有限公司据库及本体检中心实验室。时间段为2002年4月～2003年9月。
1.2 实验方法 每位检测对象取全血2ml，37℃水箱孵育30min，3000转离心5min，取120μl血清作为检测标本，采用上海数康生物科技有限公司的HD-2001A多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统操作规程进行检验。结果的分析采用上海数康生物科技有限公司提供的软件。
1.3 评价方法
1.3.1 分组统计阳性例数 使用C-12检测系统，若芯片上的信号值的超过系统的参考临界值，则认为该芯片的检测对象为阳性。
1.3.2 灵敏度 使用C-12检测系统对恶性肿瘤病人进行检测得到的阳性例数，或对非恶性肿瘤病人进行检测得到的阴性例数与被检总例数的百分比值为灵敏度。
1.3.3 特异性 使用C-12检测系统对一定数量的健康人群进行检测，得到的阴性例数与被检总例数的百分比值为特异性。
1.3.4 统计学分析，采用数据均数±标准差（x±s）表示，组间使用t检验。
2 结果
2.1 2000例10种肿瘤癌症患者用C-12检测，1项指标以上的阳性数、总灵敏度和各较高的阳性单项指标（前4项）结果见表1。
2.2 12项肿瘤标志物在10种肿瘤中的相关程度的阳性率表现，结果见表2。
2.3 随机从本实验室的人群中抽取142份样本，其中健康体检者133例，癌症患者9例。每份样本中选取AFP、CEA、CA19-9、CA15-3共计568项肿瘤标志物与罗氏2010全自动免疫分析仪上测定的相同指标平行做对照实验。并将获得的数据进行统计学分析，经统计学处理（P>0.05）无显著性差异。证明蛋白芯片检测系统具有较高灵敏度和特异性。
2.4 4000例健康人群中有3836例为阴性结果，152例为 出现假阳性结果（均为单一或两项肿瘤标志物阳性，后经 临床诊断为非肿瘤病人，假阳性与受检者的生活习惯及当时的身体健康状况有关。对健康人检测的特异性为95.9%。12例经临床确诊为肿瘤患者（有明确病理诊断），对体检人员的肿瘤的检出率为0.3%。
表1 C-12检测系统对常见10种肿瘤的检测结果（略）
表2 C-12检测系统对常见10种肿瘤的阳性表现（略）
3 讨论
不同肿瘤在不同肿瘤标志物明显的不同表现，是由肿瘤细胞生物学特性的复杂性及多态性、肿瘤发生的多步骤及多基因的癌变过程、癌变后同种肿瘤病理类型的差异、同种病理类型肿瘤细胞的异质性和肿瘤细胞基因型及细胞表型的差异等诸多所决定。因此采用联合检测 的方法同时对多种肿瘤指标进行检测将大大提高肿瘤的 检出率。其十种常见癌症瘤标志物联合检测（联合检测的指标锁定在前四项指标）的检出率明显高于单项指标的检出率。同时由于大部分病人处于治疗状态下，因此阳性检出率将低于非治疗状态。其12项指标与肿瘤发生阳性相关程度分析结果与其它报道基本相符合。
近年来发现血清AFP阴性的原发性肝癌有增多趋势，本试验中有32.8%（122例/373例）阳性检出源于其它11项指标高于正常。
消化系统癌症瘤标志物检测主要见于CA199，CA242，CEA，Fe，但其特异性均不高。以前报道CA199被认为是诊断胰腺癌的指标。但本文统计中CA242对胰腺癌有56.7%（63例/111例）的阳性检出率。Fe、CA125、CEA是胰腺癌的辅助诊断指标。CA199、CA242、CA125、Fe、CEA联合对胰腺癌检出率较高。
乳腺癌患者常有CA153升高，但在乳腺癌的初期敏感性较低，也可以作为手术后随访，监测肿瘤复发、转移的指标。
卵巢癌患者血清中CA125水平明显升高。手术和化疗后期水平很快下降。当复发时，在临床确诊前几个月便可呈现CA125增高，尤其卵巢癌转移患者的血清CA125更明显高于正常参考值。
前列腺癌患者可见血清PSA浓度升高。某些女性患者也表现出不同程度的PSA阳性。据文献报道，PSA的分泌可能与乳腺癌神经内分泌细胞分化关联。本统计中f-PSA，PSA在卵巢癌、子宫颈癌患者中占6%的比率，同时前列腺癌患者中也有15%的女性肿瘤指标CA125，CA153升高的现象。这说明男女指标并没有一个严格的界限。只是患者指标升高的相对概率高，这些现象还有待于进一步的研究。
通过本文的统计可以表明，如果不是12项肿瘤指标 同时检测，有一些肿瘤是不可能被发现的，因为常规只是单指标或三到五项指标检测某一肿瘤，不可能同时检测12项肿瘤标志物。
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作者单位:航天总医院体检中心实验室，北京 100076.