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摘要:目的 探讨植物生药龙胆草和仙鹤草伍用对伯氏疟原虫的抑制作用。 方法 86只昆明种小鼠，每只小鼠腹腔接种2×10 7 个伯氏疟原虫，随机分为6组。24h后，Ⅰ、Ⅵ组以生理盐水1ml/1次/d灌胃作为对照，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别以浓度为1g/ml的龙胆草、仙鹤草、龙胆草+仙鹤草提取液灌胃治疗，1ml/（d×7d），观察小鼠存活率和存活时间，感染后第3d自小鼠断尾采血，计算小鼠红细胞疟原虫感染率和药物对疟原虫的抑制率;Ⅴ组分3小组，用龙胆草+仙鹤草提取液按每小组不同浓度进行灌胃治疗，1ml/（d×3d），疗程结束后24h按上法计算不同浓度药物对鼠红细胞疟原虫的感染抑制率。 结果 龙胆草+仙鹤草组疟鼠累积生存率与感染对照组比较，差异有显著性（P<0.05）;龙胆草与仙鹤草伍用，在0.5～1.5g/ml生药浓度范围内对疟原虫抑制率随药物浓度的增加而增强。 结论 龙胆草与仙鹤草伍用具有抑制伯氏疟原虫的生长，对小鼠的存活状况有改善作用。
关键词:龙胆草;仙鹤草;伯氏疟原虫;小鼠
Study on anti-malaria effect of Gentiana scabra bunge and its combination with Agrimoniapilosa ledeb in mice infected with plasmodium berghei.LAI Xiu-qiu.（Department of Parasitology of Guangdong Medical College，Zhanjiang524023，Guang-dong，P.R.China）
Abstract:Objective To study the anti-malaria effect of Gentiana Scabra（GSB）Bunge and its Combination with Agrimoniapilosa ledeb（AL）in mice infected with Plasmodium Berghei. Methods KM mice were infected with2×10 7 P.Berghei each mouse and then divided into6groups.GroupⅡandⅢwere orally treated with Gentiana Scabra Bunge and Agrimo-niapilosa ledeb respectively，groupⅣwas orally treated with both of the two herbs，as control，groupⅠwas orally given distilled wa-ter.The period of treatmentwas7days.Thin blood smear were made and stained with Giemsa stain each day starting from day3post-infection for3days;groupⅤwas divided into3little groups，which were orally treated with different concentration of extraction from Gentiana Scabra Bunge and its Combination with Agrimoniapilosa ledeb，as control，groupⅥwas orally given distilled water.The period of treatment was3days，after24hours of the treatment，thin blood smear were made and stained with Giemsa stain.The rates and days of total survival in mice together with the anti-malaria effect by using different concentration of herbs were investigat-ed. Results Compared with control groupⅠ，The rates of total survival of group Gentiana Scabra Bunge and its Combination with Agrimoniapilosa ledeb was boosted up significantly（P<0.05）;The anti-malaria effectwas boosted up along with the concentration of Gentiana Scabra Bunge and its combination with Agrimoniapilosa ledeb from0.5g/ml to1.5g/ml. Conclusion Extraction of Gentiana Scabra Bunge and its combination with Agrimoniapilosa ledeb had the function of anti-malaria and enhanced the survival of
mice infected with P.Berghei（2×10 7 each mouse）.
Key words:Gentiana Scabra Bunge;Agrimoniapilosa ledeb;Plasmodium berghei;Mouse
疟原虫对原有抗疟药物产生耐药性已经是个全球性问题，寻求新的有效抗疟药已成为控制疟疾主要的研究课题。我国传统医学和民间验方中记载可用于抗疟的中草药种类很多，龙胆草（Gentiana Scabra Bunge，GBS）属龙胆科龙胆属，多年生草本植物。龙胆草药用其根，味苦，性寒，有清肝胆实、杀菌、消炎等作用 ［3］ ;仙鹤草为蔷薇科多年生草本植物龙芽草（Agrimonia pilosa ledeb，AL）的全草，具有止痢、杀虫和抗疟等功效 ［4］ 。经过初步筛选，本实验选用上述两味中药配伍及单方使用，以伯氏疟原虫感染小白鼠为动物模型，旨在探索其抗疟作用并为下一步阐明其抗 疟疾机制的研究奠定基础。
1 材料与方法
1.1 实验材料 从药材市场购回人工栽培的龙胆草根和仙鹤草。经过鉴定后，将龙胆草根粉碎，放入密闭的玻璃瓶内存放;昆明种小鼠由广东医学院动物中心提供。P.Berghei疟原虫为本室保种。
1.2 实验方法
1.2.1 称取龙胆草根粉（5±1）g，放入250ml烧杯中，加入60ml70%乙醇，置50℃水浴提取2h后，以3000r/min离心10min，倒上清液于已知重量的250ml脂肪瓶中，残渣再以上述方法提取2次，上清液合并于脂肪瓶中，用索氏提取器回收乙醇后，置脂肪瓶于烘箱（70～80℃）烘至恒重，用无菌蒸馏水配成0.5g/ml、1.0g/ml和1.5g/ml等生药浓度，装入灭菌药瓶，置4℃冰箱备用。将所需仙鹤草安排常规煎成0.5g/ml、1g/ml和1.5g/ml等生药浓度，冷却后装入灭菌药瓶，置4℃冰箱备用。
1.2.2 称取体重18～22g健康KM小鼠86只，每只小鼠腹腔接种2×10 7 个伯氏疟原虫，随机分感染对照组（Ⅰ组和Ⅵ组）、龙胆草组（Ⅱ组）、仙鹤草组（Ⅲ组）、龙胆草+仙鹤草组（Ⅳ组和Ⅴ组，其中Ⅴ组共30只小鼠，分3小组），Ⅰ～Ⅳ组及Ⅵ组每组10只，常规分罐饲养，于接种后24h，Ⅰ组为对照，用生理盐水1.0ml/次灌胃，1次/d×7d，Ⅱ组、Ⅲ组分别用浓度为1.0g/ml的龙胆草和仙鹤草的提取液灌胃治疗，1.0ml/d×7;Ⅳ组用浓度均为1.0g/ml的龙胆草和仙鹤草混合提取液灌胃治疗，1.0ml/d×7，记录每天各组小鼠死亡数目;Ⅴ组中的3小组小鼠分别用浓度为1.5g/ml、1.0g/ml及0.5g/ml的龙胆草+仙鹤草提取液按每组不同浓度进行灌胃治疗1.0ml/d×3，Ⅵ组作为对照，用生理盐水灌胃1.0ml/d×3。第Ⅰ～Ⅳ组自感染后第3d和V组自疗程结束后24h自小鼠断尾采血涂片，用姬氏染色，显微镜下计算小鼠红细胞疟原虫感染率和药物对疟原虫的抑制率（%）。
感染抑制率=对照组平均感染率-治疗组平均感染率对照组平均感染率 ×100%
2 结果
2.1 小鼠的存活时间及存活率 小鼠的存活天数和累积存活率见图1（略）。将Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组小鼠累积存活率进行统计学处理，（Ⅰ、Ⅳ组χ 2 =8.47，P<0.05;Ⅰ、Ⅱ组χ 2 =0.26，P>0.05;Ⅰ、Ⅲ组χ 2 =1.03，P>0.05）。
2.2 不同生药及配伍用药的抗疟效果 各提取物的 抗疟效果见表1。表1 龙胆草和仙鹤草单用或配伍的抗疟效果（略）
2.3 不同浓度提取物的抗疟疾效果 分别用浓度为1.5g/ml、1g/ml及0.5g/ml的龙胆草+仙鹤草提取液对Ⅴ组中的3小组小鼠灌胃。此3小组疟鼠的红细胞疟原虫抑制率分别为89.4%、87.7%和60.3%。
3 讨论
仙鹤草素具有抗凝及促凝作用外，还有抗菌、抗滴虫作用，仙鹤草煎剂在临床应用于治疗滴虫性阴道炎和绦虫症具有很好的疗效。龙胆煎剂对绿脓杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌等有抑制作用 ［5］ ，临床也有报道以龙胆草用于治疗滴虫性阴道炎 ［6］ 。本实验结果表明仙鹤草对伯氏疟原虫有一定的抑制作用，而1.0g/ml生药浓度的龙胆草提取液对疟原虫的抑制作用似不明显。从累计存活率来看，Ⅱ组、Ⅲ组分别与Ⅰ组比较，P均>0.05;Ⅰ组、Ⅳ组比较，χ 2 =8.47，P<0.05。提示龙胆草与仙鹤草单方使用对提高疟鼠的累积存活率效果不明显，而二者配伍则可以抑制伯氏疟原虫的生长，明显改善感染疟原虫小鼠的生存状况;不同生药在相同药物浓度下，仙鹤草对疟原虫的抑制作用较龙胆草略强，二者配伍则抑制作用大大提高;从抑制率看，二者配伍用药的抗疟效果在0.5～1.5g/ml生药浓度范围内随药物浓度的增大而增强。上述生药单方使用对提高疟鼠累积存活率、对疟原虫抑制效果不甚理想，而伍用则效果明显，其伍用抗疟机制有待进一步研究。
参考文献:
［1］赵永焕，朱桂华，赵海英，等.龙胆草有效成分提取方法的研究［J］.
黑龙江八一农垦大学学报，1997，9（3）:83～84.
［2］赵莹，刘金平，李平亚.仙鹤草化学成分及药理研究进展［J］.特产
研究，2001，1:50～53.
［3］崔征.生药学［M］.北京:中国医药科技出版社，185～187.
［4］陈凤娥.龙胆泻肝汤治疗滴虫性医道炎152例［J］.河南中医，2001，21（3）:48.
作者单位:广东医学院寄生虫学教研室，广东湛江 524023.
作者简介:赖秀球（1968～），女，医学硕士，讲师，主要从事医学原虫研究.
收稿日期:2005-03-09;修回日期:2005-04-18