多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统对肺癌的诊断价值

　　摘要:目的 研究多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统对肺癌的诊断价值。 方法 用多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统测定分析116例肺癌患者，42例肺良性疾病患者和165例正常人血清中肿瘤标志物（CA199、NSE、CEA、CA242、CA125、CA153、AFP、Fe、f-PSA、PSA、β-HCG、HGH）的水平。 结果 116例肺癌患者有88例血清肿瘤标志物为阳性，阳性率为75.9%;42例肺良性疾病患者有7例血清肿瘤标志物为阳性，阳性率为16.7%;165例正常人血清中没有发现阳性。 结论 多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统的应用对肺癌的诊断有较高的临床参考价值。
   
　　关键词:肺癌;肿瘤标志物;蛋白芯片

　　The diagnostic value of multiple tumor markers detection protein chip in diagnosis of lung cancer.

　　ZHENG San.

　　（Labo-ratory Department of Affiliated Hospital of Hainan Medical College，Haikou570102，Hainan，P.R.China）
   
　　Abstract:Objective To assess the value of multi-tumor marker protein biochip detective system in diagnosis of lung cancer. Methods The levels of12tumor markers（CA199，NSE，CEA，CA242，CA125，CA153，AFP，Fe，f-PSA，PSA，B-HCG，HGH）in sera of116lung cancer patients，42patients with benign pulmonary disease and165normal persons were determined，ana-lyzed by using multi-tumor markers protein biochip detective system. Results At least one kind of tumor marker was found higher in88sera of the116lung cancer patients with a positive rate of75.9%.Seven sera of42patients with benign pulmonary disease positive with a positive rate of16.7%.No tumor markers were observed in165normal persons. Conclusion Multi-tumor mark-er protein biochip detective system possesses clinical reference value in diagnosis of lung caner.
   
　　Key words:Lung cancer;Tumor marker;Protein biochip
      
　　肿瘤血清标志物作为诊断肿瘤的辅助性指标在临床上已得到广泛应用，其在肺癌的诊断中具有重要参考价值，但仅靠单一指标进行测定，其敏感性和特异性均有限，特别是对早期肿瘤的阳性检出率较低。为了弥补单指标检测的不足，提高诊断肿瘤的准确性，临床上采用多指标肿瘤标志物联合检测某一肿瘤。蛋白芯片是一种高通量、高灵敏度、高特异性且微型化的蛋白质分析技术 ［1］ ，是研究同一种细胞中成千上万个蛋白分子变化的情况。抗体芯片（Antibody Microarray，抗体微阵列）是蛋白质芯片的一种，是检测生物样品中蛋白表达模式的新方法。实验表明，该项技术对多种疾病的早期诊断有一定的作用价值 ［2，3］ 。本实验利用多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统同时检测116例肺癌患者，42例肺良性疾病患者和165例健康体检人群血清肿瘤标志物CA199、NSE、CEA、CA242、CA125、CA153、AFP、FE、f-PSA、PSA、β-HCG、HGH等12种肿瘤标志物的水平，以探讨其对肺癌的诊断价值。

　　1 材料与方法
   
　　1.1 检测对象 健康组为海南医学院附属医院165例健康体检人群的血清标本，平均年龄45岁，其中最大75岁，最小22岁;肺良性疾病组为该院住院患者42例，包括肺炎17例，支气管哮喘10例，支气管扩张7例，肺气肿8例;平均年龄43岁，其中最大79岁，最小25岁;肺癌组为该院住院患者血清标本116例，均经细胞学或组织学确诊为肺癌，平均年龄52岁，其中最大87岁，最小23岁。
    　　
　　1.2 测定方法 血清检测方法按照上海数康生物科技有限公司多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统进行多肿瘤标志物测定。

　　1.3 正常值参考范围 CA125<35KU/L，CA199<35KU/L，CEA<5ng/ml，NSE<13ng/ml，CA242<20KU/L，Fe（男）<322ng/ml，（女）<219ng/ml，β-HCG<3ng/ml，AFP<20ng/ml，f-PSA<1ng/ml，PSA<5ng/ml，HGH<7.5ng/ml，CAl53<35KU/L。
   
　　1.4 结果判断 检测结果超过临界值即为阳性（Fe单独升高不计入阳性数）。
   
　　2 结果
   
　　多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统对116例肺癌患者，42例肺良性疾病患者和165例健康体检人群血清进行联合检测结果。肺癌组，检测116例中，阳性88例，阳性率为75.9%。肺良性疾病组，检测42例中，阳性7例，阳性率为16.7%。健康组，检测165例，全部为阴性。结果经处理显示:肺癌组与肺良性疾病组、肺癌组与健康组以及肺良性疾病组与健康组之间均存在有差异显著性（P<0.001）。见表1～2。

　　表1 12种肿瘤标志物在肺癌组与肺良性疾病组中的阳性率（略）

　　表2 在各组中血清肿瘤标志物的阳性率（略）

　　采用多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统联合检测116例肺癌患者血清，各种肿瘤标志物的阳性率，见表3。
   
　　表3 116例肺癌患者血清各肿瘤标志物的阳性率（略）

　　表3显示，CEA、CA125、Fe、CA199、CA242在肺癌的诊断中阳性分别为44.0%，38.8%，35.3%，27.6%，23.3%，其他各项标志物阳性检出率都较低。
   
　　3 讨论
   
　　肺癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，而肺癌的早期诊断和早期治疗是提高疗效最有效的手段。如何提高肺癌早期诊断水平，一直是肺癌研究工作的重点。目前所发现的肿瘤标志物检测在肺癌诊断中具有一定的价值，但单一标志物检测始终存在着敏感性、特异性不足之处，特别是对肺癌的早期检出率不高。因此，为了弥补单指标检测的不足，提高肺癌的诊断敏感性，临床上常对先现有的肿瘤标志物进行联合检测 ［4］ 。蛋白芯片技术具有高通量、高灵敏度、高特异性和微型化的优点，是一种多指标检测肿瘤标志物的新析技术，其原理是基于双抗体夹心法的化学发光检测方法，在固相基质上包被12种肿瘤标志物的抗体，捕捉被检者血清中对应的肿瘤标志物，结合第二抗体（标有示踪标志物），通过特定的化学反应产生光信号，来实现对肿瘤标志物进行定量检测的目的，它正好弥补了其它检测方法之不足。CAl25是胚胎发育过程中体腔上皮表达的一种大分子糖蛋白，是一种似粘液蛋白复合物，最初认为是卵巢癌特异性，经深入研究为一种广谱的标志物，其表达水平在肺癌患者和正常人中差异有显著性，其血清含量在肺腺癌中明显升高。CEA最早分离于人结肠癌，后发现3～6个月胎儿的肠、胰腺及肝均有CEA存在。最初认为CEA是结、直肠癌的特异性标志物，其后发现在由内胚层细胞分化而来的其它恶性肿瘤也可以呈阳性。进一步研究发现，在一些良性肿瘤和一些非肿瘤性疾病，血清中CEA浓度也会升高。因此，CEA是一种广谱 肿瘤标志物。血清CEA在30%～80%肺癌患者血清中其浓度升高，升高程度与癌细胞的多少有直接关系，肺腺癌中犹为显著，并与肿瘤转移和复发相关，对预后有指导意义 ［5］ 。铁蛋白在各种恶性肿瘤中均有不同程度升高，是一种非特异性指标，单独出现无特殊意义。有文献报道，铁蛋白是与原发性肺癌预后有关的因素，有监测和预后的意义 ［6，7］ 。CA199胚胎期间胎儿的胰腺、胆囊、肝、肠等组织中存在这种抗原，但正常人体组织中含量甚微。在消化道恶性肿瘤，特别是胰腺癌、胆囊癌患者血清中CA199含量明显升高;在肺癌中也见升高，但其敏感性较低。CA242是一种与粘蛋白有关的标志物，也是一种唾液酸化的糖脂类抗原，所以CA242也可应用于肺癌的辅助诊断，对肺癌也有一定的阳性检出率，但其特异性、敏感性较低。NSE是神经和神经内分泌组织中的一种参与糖酵解的酸性蛋白酶，主要作用是催化二磷酸甘油变成烯醇式磷酸丙酮酸。研究发现小细胞肺癌是一种恶性程度高并能分泌NSE的神经内分泌性质肿瘤。故NSE与小细胞肺癌密切相关，为小细胞肺癌特异性标志物（敏感性为55%～80%;特异性为75%～95%） ［5，8］ 。但NSE指标在血清中很不稳定，作为一种酶，其活性将会随着时间的延长而迅速下降，检出率则相应降低。因此，如何长时间保持血清中NSE的活性值得进一步深入研究。
   
　　本实验采用多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统正是运用蛋白芯片技术，通过同时定量分析被检者血清中的12种肿瘤标志物的含量，对肺癌进行联合检测分析。研究表明，运用多肿瘤标志物蛋白芯片技术可以提高肺癌诊断的敏感性（75.9%），对肺癌及各类肿瘤的诊断有较高的临床参考价值。
   
　　由于血清肿瘤标志物均为非特异的肿瘤相关抗原，大多无器官特异性，同一种肿瘤可以有几种不同的肿瘤标志物，不同肿瘤可能有相同的肿瘤标志物，其检测肿瘤的敏感性及特异性均有限，所以更适合于无明显症状的门诊患者和肺癌高危人群的筛查。但是由于一些对肺癌具有较高诊断价值的肿瘤标志物，如M2-PK、CYFRA21-1等 ［4，9］ 均未包括在多肿瘤标志物蛋白芯片内。因此，该检测系统还需进一步改进，通过剔除某种标志物，增加其他标志物，不断提高诊断的敏感性和准确度。

　　参考文献:
    
　　［1］Von Eggeling F，Davies H，Lomas L，et a1.Tissue-specific microdissection coupled with ProteinChip array technologies:applications in cancer research［J］.Biotechniques，2000，29（5）:1066～1070.
   
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　　［7］胡艳萍，钟爱军，杨小玲，等.晚期非小细胞肺癌患者血清CA125水平的预后价值［J］.中华肿瘤杂志，2000，22（1）:30～31.
    
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