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【摘要】 目的 探讨肠内营养联合白介素-6在肝硬化大鼠肝切除术后的作用。 方法 6只正常大鼠作为正常对照组，将24只肝硬化大鼠随机分为术前组6只，肝切除术后1d组6只，肝切除术后行肠内营养（EN）5d组6只，肝切除术后行EN+IL-6 5d组6只。测定大鼠肝功能、免疫功能、炎症反应和脂质过氧化。 结果 与EN 5d组比较，EN+IL-6 5d组血清ALB、IGF-1显著升高(P<0.05)，外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞显著升高(P<0.05)，外周血CD8+显著下降(P<0.05)，血清IFN-γ、TNF-α、MDA显著下降(P<0.05)，血清SOD活性显著升高(P<0.05)。 结论 EN+IL-6可以加快肝硬化大鼠肝切除术后肝功能的恢复，促进肝脏蛋白合成，改善术后免疫功能低下，减轻炎症反应和脂质过氧化损伤。
【关键词】 肝硬化 肝切除术 肠内营养 白介素-6
Experimental observation on the effect of pariteral nutriton and leukin-6 on recovery of hepatic fuanction of liver-removed rat.
BAO Pin-hong, LUO Shi-min, LI Wang-lin, et al.
(The First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical College, Guangzhou 510180, Guangdong, P. R. China)
Abstract：Objective To explore the effect of enteral nutriton plus interleukin (IL-6)on revocery of hepatic function of cirrhotic rats. Methods Six normal rats were arranged in normal group, 24 rats with liver cirrhosis were randomly divided into four groups each consisted of 6 rats, namely: pre-operation group, post-operation 1 day group, post-operation EN 5 day group and post-operation EN+IL-6 5 day group. Liver function, immunological function, inflammatory responses,and lipid peroxidation of the rats were determined. Results Compared with the enteral nutrition 5 day group, levels of serum ALB and IGF-1 were higher (P<0.05), the peripheral blood CD3+, CD4+, CD4+/CD8+ ratio, nature kill cells were higher (P<0.05), CD8+ was lower (P<0.05), serum IFN-γ, TNF-α and MDA content were lower (P<0.05), serum SOD was higher (P<0.05) in the EN+IL-6 5 day group. Conclusion Posthepatectomy enteral nutrition with IL-6 in cirrhotic rats can speed up the recovery of liver function, promote liver protein synthesis, ameliorate the damage to immunological function and reduce inflammatory responses as well as lipid peroxidation damage.
Key words：Liver cirrhosis; Hepatectomy; Enteral nutrition; Interleukin-6
肝硬化患者常存在营养不良和高分解代谢，同时肝硬化本身，尤其是术后，患者均处于高代谢状态，能量消耗增多，急需要营养支持，以保持机体内氮的平衡和避免过多地体质消耗。肠内营养（Enteral nutrition，EN）与肠外营养（Parenteral nutrition，PN）相比，营养摄入途径更符合正常生理过程。如何避免肝硬化肝切除术后肝功能衰竭的发生，促进肝功能的恢复和加快肝再生，一直是研究的热点。经白介素-6（Interleukin-6，IL-6）/信号传导和转录激活因子-3（Signal transducers and activators of transcription-3，Stat-3）信号通道的肝保护作用（促进肝再生［1］），为IL-6在肝硬化营养支持方面的应用提供了理论依据。本研究旨在探讨EN联合IL-6在肝硬化大鼠肝切除术后的作用。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 复制肝硬化大鼠模型 雄性Wistar大鼠饮用0.03%硫代乙酰胺（Thioacetamide, TAA）溶液12周来复制肝硬化模型［2］。实验动物30只为分5组：A组，正常对照（n=6）；B组，肝硬化术前（n=6）；C组，肝硬化切肝术后1d（n=6）；D组，肝硬化切肝术后EN 5d（n=6）；E组，肝硬化切肝术后EN+ IL-6 5d (n=6)。其中，切肝均按Higgins法切除肝中叶（约为肝脏的35%），EN、IL-6均于切肝术后1d开始。
1.2 方法
1.2.1 肝切除术后EN动物模型制作方法 肝硬变大鼠插管前1d放入代谢笼中适应环境并禁食，可饮水。术前称体重，乙醚麻醉后，大鼠先切除肝中叶，然后行胃造瘘，即胃内置入内径为0.9mm的硅胶管。导管经皮下从颈后穿出、固定，并通过保护弹簧引出，大鼠放入鼠代谢笼中，连接旋转器及微剂量型输液器（山东威高集团医用高分子制品股份有限公司）。
1.2.2 营养液的配制及输液管理 EN进行5d，参照我们过去的经验［3］，EN组大鼠按100g体重给予营养液18.0ml（50%GS 5.1ml、20%中/长链脂肪乳3.4ml、10%安平8.0 ml、3%NaCl 0.9ml、10%KCl 0.3ml、Addamel 0.1ml、Soluvit 0.1ml、Vitalipid 0.1ml），其中非蛋白质热量171.5 kcal/(kg.d)，氮量1.22g/kg·d，热氮比为140:1，脂肪乳剂提供36%的热量，其中脂肪乳选用20%力能（中/长链脂肪乳，华瑞制药有限公司），氮源由10%安平(Hepa，贝朗公司)提供，含有20种氨基酸的溶液，支链氨基酸占33.0%。输液速度为3ml/h。重组大鼠白介素6（Recombinant rat interleukin-6，Sigma公司）按1 μg/kg·d静脉注射，连续5d。
1.2.3 检测指标及其测定方法 各组大鼠（D组、E组于术后6d）清晨空腹眼眶采血，检测下列指标。（1）肝功能指标：自动生化分析仪测定血清AST、ALT、ALP、TBIL、ALB浓度，ELISA法测定血清胰岛素样生长因子-1（Insulin like growth factor-1，IGF-1）浓度。（2）免疫指标：流式细胞仪测定全血T细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)及NK细胞(CD3+CD16+CD56+)。（3）炎症反应指标：ELISA法测定血清IL-6、IFN-γ、TNF-α浓度。（4）脂质过氧化损伤指标：黄嘌呤氧化酶法测定血清超氧化物歧化酶(Superoxide disumutase，SOD)活性，硫代巴比妥酸法测定血清丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量。
1.3 统计学处理 定量数据用x±s表示，采用SPSS10.0统计软件进行分析，组间比较采用方差分析。
2 结果
2.1 各组肝功能变化 B组与A组比较，血清AST、ALT、ALP显著升高（P<0.05），血清ALB、IGF-1显著降低（P<0.05），血清TBIL无明显差别(P>0.05)。C组与B组比较，血清AST、ALT、ALP显著升高（P<0.05），血清ALB、IGF-1显著降低（P<0.05），血清TBIL无明显差别(P>0.05)。D组、E组与C组比较，血清TBIL三组间无明显差别(P>0.05)；血清AST、ALT、ALP，D组、E组均低于C组（P<0.05），但E组、D组间无明显差别(P>0.05)；血清ALB、IGF-1，D组、E组均高于C组（P<0.05），但E组高于D组（P<0.05）。见表1。
表1 各组肝功能指标的变化（略）
Table 1 Liver function marker level in different groups
注:B组vs A组，P<0.05；C组vs B组，△P<0.05；D组或E组vs C组，＃P<0.05；E组vs D组，▲P<0.05。
2.2 各组免疫指标的变化 B组与A组比较，外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK细胞均显著降低（P<0.05）；C组与B组比较，外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均显著降低（P<0.05）， NK细胞无明显差别(P>0.05)；D组、E组与C组比较，D组外周血CD4+、CD4+/CD8+低于C组（P<0.05），E组外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞高于C组（P<0.05），而外周血CD8+低于C组（P<0.05），但E组外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞高于D组（P<0.05），外周血CD8+低于D组（P<0.05）。见表2。
表2 各组免疫指标的变化（略）
Table 2 Immunologic marker level in different groups
B组vs A组，P<0.05；C组vs B组，△P<0.05；D组或E组vs C组，＃P<0.05；E组vs D组，▲P<0.05。
表3 各组炎症反应指标和脂质过氧化损伤指标的变化（略）
Table 3 Inflammatory and lipid peroxidation damage marker level in different groups
B组vs A组，P<0.05；C组vs B组，△P<0.05；D组或E组vs C组，＃P<0.05；E组vs D组，▲P<0.05。
3 讨论
我国80%以上肝癌病人同时合并有肝硬化或慢性肝炎等基础肝病，肝脏储备功能低下是十分常见的问题，而肝脏储备功能低下可以造成糖代谢、脂代谢和氨基酸代谢功能障碍，以及肝脏解毒功能低下、凝血功能和免疫功能低下等。肝硬化患者常存在营养不良和高分解代谢。众多研究表明，肝硬化患者具有高的手术并发症发生率和死亡率［6,7］，而营养不良是一个重要的手术危险因素，而适当的营养支持可有效地改善肝功能损害患者的预后。按照“当肠道有功能，且能安全使用时，应用它”的原则，只要患者的条件许可，肝硬化术后就应尽可能采用早期肠内营养。
肝切除术本身可以加重肝功能损害，同时肝切除术往往需阻断入肝血流以减少术中出血，但常导致肝脏的缺血再灌注损伤，而肝硬化肝切除术后的再生能力明显下降，因而肝硬化肝切除术后肝功能衰竭的发生率高。如何避免肝硬化肝切除术后肝功能衰竭的发生，促进肝功能的恢复和加快肝再生，一直是研究的热点。IL-6是一种由184个氨基酸组成，分子量约为26KD的蛋白质，是一类多功能细胞因子，也是肝脏中一种关键的肝再生因子原和急性反应诱导因子［10］。IL-6的主要作用是诱导肝切除术后机体内环境稳定和存活的适应性反应［4］。经IL-6/Stat3信号通道的肝保护作用，促进肝再生［1］。IL-6作用于淋巴细胞，诱导其增殖、分化和生长，产生IL-2、IgM、IgG等并增加IL-2R的表达，增强NK和CTL细胞的杀伤活性。IL-6可与其它细胞因子协同作用，直接或间接作用于肿瘤细胞，造成一种正反馈细胞因子网络体系共同参与直接或间接杀伤肿瘤细胞。IL-6的抗肿瘤作用为其在营养支持的开发应用提供了良好的前提条件。
肝硬化患者IGF-1合成紊乱，并能反映疾病的严重程度，IGF-1可作为反映肝功能变化的一个良好指标［5］。IGF-1通过内分泌、旁分泌和自分泌作用于靶细胞，引起合成代谢改变，表现在转录及翻译水平上促迸蛋白质合成，促进脂肪分解及糖原异生，促进葡萄糖氧化，从而提高能量代谢水平。本研究结果发现，TAA诱导的肝硬化大鼠存在肝功能损害、免疫功能低下、炎症反应和脂质过氧化损伤，表现为血清AST、ALT、ALP升高，血清ALB、IGF-1降低，外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞降低，血清IL-6、IFN-γ、TNF-α、MDA升高，血清SOD活性降低。肝切除术后1d，肝功能损害、免疫功能低下、炎症反应和脂质过氧化损伤进一步加重，表现为血清AST、ALT、ALP迅速升高，血清ALB、IGF-1进一步降低，外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+进一步降低，外周血CD8+升高，血清IL-6、IFN-γ、TNF-α、MDA进一步升高，而血清SOD活性进一步降低。单纯EN 5d之后，血清AST、ALT、ALP降低，血清ALB、IGF-1升高，外周血CD4+、CD4+/CD8+降低，血清IL-6、IFN-γ、TNF-α、MDA降低，血清SOD活性升高。可见，单纯PN 5d，虽然肝功能有所恢复，炎症反应、脂质过氧化损伤减轻，但血清ALB仍低，同时，免疫功能进一步下降。
EN+IL-6与EN比较，血清ALB、IGF-1升高，外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞升高，外周血CD8+降低，血清IL-6、SOD活性升高，血清IFN-γ、TNF-α、MDA降低。可见，PN+IL-6可以加快肝功能的恢复，促进肝脏蛋白的合成，增强免疫功能，减轻炎症反应、脂质过氧化损伤。同时发现，给予IL-6，虽然血清IL-6升高，血清IFN-γ、TNF-α、MDA不会相应升高，反而降低，可见外源性IL-6不会加重全身炎症反应、脂质过氧化损伤。
总之，肠内营养联合白介素-6可以加快肝硬化大鼠肝切除术后肝功能的恢复，促进肝脏蛋白合成，改善术后免疫功能低下，减轻炎症反应和脂质过氧化损伤。
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作者单位：广州医学院附属市一人民医院,广东 广州 510180 .