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【摘要】 的 探讨基因重组抗原ELISA法在梅毒螺旋体抗体检测中的临床意义。 方法 用甲苯胺红不加热血清实验（TPPA）对355份梅毒患者和非梅毒患者的临床血清标本进行检测。 结果 以TPPA阳性者为标准，TRUST有7份为假阴性，4份为假阳性；TRUST和ELISA的敏感性、特异性分别为92.7%、98.3%和100%、99.1%。TRUST与TPPA的符合率为96.3%，ELISA与TPPA的符合率为99.4%。ELISA的敏感性、特异性都优于TRUST，与TPPA符合率高。 结论 重组抗原ELISA法检测梅毒螺旋体特异性抗体具有敏感性高、特异性好、结果客观、自动化程度高等优点，适用于梅毒初筛和确诊。
【关键词】 梅毒 酶联免疫吸附实验 甲苯胺红不加热血清实验 梅毒螺旋体明胶凝集试验
Clinical significance of detection of antibody to Treponema pallidum by ELISA.
ZHOU Xiao, YE Hui-min.
(Huizhou Municipal Central Peopel’s Hospital, Huizhou 516001, Guangdong, P. R. China)
Abstract：Objective To evaluate the clinical sigificance of recombinant antigens-based enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) technique in detecion of antibodies against Treponema pallidum. Methods Three hundred and fifty-five clinical serum samples from persons with syphilis or without syphilis were detected by the Toluidine red unheated serum test (TRUST), the T.pallidum particle agglutination(TPPA) assay and the recombintant antigen-based ELISA,respectively. Results Using the TPPA as a standard method, 8 samples were found to be false positive and 4 were false negative by the TRUST. However, only two samples were false positive and no false negative was observed by the ELISA. The overall specificity and sensitivity of TRUST was 92.7% and 98.3%, respectively. The specificity and sensitivity of ELISA were 100% and 99.1%, respectively. The agreement between TRUST and TPPA was 96.3%. The agreement between TRUST and TPPA was 99.4%. ELISA was more sensitive and specific than that of TRUST and ELISA was highly coincident with that of TPPA. Conclusion The recombinant antigen-based ELISA technique is a sensitive, specific, objective and easily automated method, suitable for screening and confirmatory diagnosis of syphilis.
Key words：Syphilis; TPPA; TRUST; Treponema pallidum; ELISA
梅毒是一种性传播疾病,在我国出现上升趋势。当前我国实验室诊断梅毒常用TRUST或快速血浆反应素试验（RPR）筛选后再用TPPA或螺旋体血球凝集试验（TPHA）等确证。前类试验有较高的生物学假阴性和假阳性，后类试验则成本高、不能自动化、结果判断受主观影响。重组抗原ELISA是近年发展检测梅毒的方法，具有敏感性高、特异性好、自动化程度高、易于标准化等优点，本研究应用其对临床检测进行评价，现报告如下。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 临床标本 均来自广东惠州市中心人民医院，包括性病门诊124例梅毒血清，其中24例为一期梅毒、28例为早期潜伏梅毒、72例为二期梅毒，各期梅毒的诊断按标准方法进行［2］。59例门诊病人（其中19例类风湿关节炎、40例慢性乙型肝炎），172例献血员血清由血站提供。
1.1.2 试剂 TRUST试剂盒（上海荣胜生物技术有限公司）；TPPA试剂盒（日本富士生物株式会社）；重组抗原ELISA（双抗原夹心）试剂盒（厦门新创科技有限公司）。
1.2 方法 所有血清TRUST试剂盒、重组抗原ELISA试剂盒TPPA试剂盒。试剂盒操作均在有效期之内，严格按说明书进行。TRUST和TPPA目测观察结果；ELISA结果用酶标仪测光密度（OD值），以 cut off值为界判断结果。
2 结果
3种血清学方法检测355份血清白标本的结果见表1，从表中可得知ELISA和TPPA均为阳性的24例一期梅毒和28例早期潜伏梅毒中，TRUST分别为4例和3例阴性，而ELISA和TPPA均为阴性的类风湿患者的TRUST有4例为假阳性。TRUST和ELISA的敏感性、特异性分为92.7%（115/124）、98.3%（227/231）和100%（124/124）、99.1%（229/231）。TRUST与TPPA的符合率为96.3%（342/355）。ELISA与TPPA的符合率为99.4%（353/355）。
3 讨论
梅毒（Syphilis)是由苍白螺旋体（Treponema Pallidum,TP)所引起的一种严重危害人类健康的性传播疾病，近年来在我国有逐年上升趋势。选择好的检测方法，可直接影响到梅毒的治疗和预防。在我国当前大多数单位仍然采用检测非特异性抗体（如TRUST、RPR）作为梅毒初筛，阳性者再用检测特异性抗体（如TPPA、TPHA）作确诊。非特异性的检测试剂成本低、操作简便，结果易读，常用于梅毒的初筛，但其检测的是非特异性的抗心磷脂抗体，易受许多因素的影响，对于其他一些非梅毒者如红斑狼疮、类风湿自身免疫性疾病、孕妇等易产生生物学假阳性，及人工假阳性［1］，特异性低。在本研究中，有4例TRUST为阳性的标本经TPPA确定为假阳性；此外，抗心磷脂抗体在梅毒的非活动期和治疗后易消失，对隐性梅毒早期或晚期梅毒和治疗后梅毒的敏感性低［2］，造成假阴性而漏诊，本研究中一期、隐性梅毒共有8例TRUST阴性而TPPA为阳性，表明单靠检测非特异性抗体来筛查梅毒易造成漏检，给健康人群带来潜在的危害，应引起检测单位的足够重视。TPPA采用梅毒螺旋体天然抗原作为诊断抗原，有很高的特异性，采用间接凝集反应的原理，敏感性高，作为确证试验在世界许多国家被广泛使用，但梅毒螺旋体至今不能体外人工培养，抗原来源困难，因而TPPA试剂盒成本高，此外，TPPA测定包括多次吸液过程，会造成操作者出错的风险［3］，还有该方法结果都依赖于操作者肉眼来判断和解释，结果不易保存。并且，先初筛再进行确诊操作烦琐。近年来，随着梅毒螺旋体全基因序列的解析，通过基因工程途径生产重组蛋白抗原或多肽作为抗原，应用酶联免疫吸附试验（ELISA）将TP重组抗原包被在微孔测定板上，使试剂盒成本大大降低，重组抗原特异性高、纯度高，多种重组抗原联合使用可得到更高的敏感性和特异性，结合ELISA双抗原夹心法，使重组抗原ELISA双抗原夹心试剂盒具有高度特异、灵敏、能自动化、标准化等优点，尤其适用于大样本的测定。本实验中，在总共355份标本中，ELISA假阳性仅2份，无漏检，以TPPA结果为参照，ELISA的敏感性、特异性为100%、99.1%，表明ELISA与TPPA有良好的相关性；而TRUST的敏感性、特异性为92.7%、98.3%，ELISA敏感性和特异性均高于TRUST。国内外的研究也表明，梅毒-ELISA是目前检测梅毒的一种良好方法。
表1 355份血清标本TRUST、ELISA和TPPA检测结果（略）
总之，双抗原夹心ELISA法具有敏感性高，特异性好，能自动化，判断结果客观准确，成本低，操作简便等优点，是一种集筛查和确诊为一体的检测梅毒的好方法，值得临床大力推广。
【参考文献】
［1］ 叶应抚. 全国临床检测操作规程［M］.第2版.南京：东南大学出版社，1997,432.
［2］ 杨文林，杨健，刘丹莹,等.早期梅毒治疗前后血清学分析［J］.临床皮肤科杂志，1998，27（5）：314.
［3］ 龚匡隆.梅毒血清学试验的内部质量控制［J］.中国皮肤性病学杂志，1997，11（1）：31.
作者单位：惠州市中心人民医院检验中心，广东 惠州 516001.