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【摘要】 对土槿皮乙酸的抗肿瘤、抗生育、抗血管生成、抗真菌等药理学作用进行综述。
【关键词】 土槿皮乙酸 药理作用 毒性反应
土槿皮为松科植物金钱松(Pseudolarix kaempferi Gorden) 的干燥根皮或近根树皮，其性温、味辛、有毒，归肺、脾经。土槿皮具有杀虫、止痒的功效，常用于治疗癣症。土槿皮乙酸（Pseudolaric acid B）是从土槿皮中分离得到的新型二萜酸化合物，分子式为C23H28O8，结构式见图1。现代药理实验研究表明, 土槿皮乙酸具有抗肿瘤、抗生育、抗血管生成、抗真菌等作用。本文对土槿皮乙酸的药理作用及毒性反应进行综述。
图1 土槿皮乙酸化学结构式（略）
1 抗肿瘤作用
土槿皮乙酸对 KB, A-549, HCT-8, P-388, L-1210等肿瘤细胞株有明显的细胞毒作用, 其ED50值在0.17～0.66μg/ml范围之间。和抗真菌作用相似, 其侧链上的羧基和4位乙酰基可增强其细胞毒作用, 其7-8位之间的双键也可显著影响其细胞毒活性［1,2］。土槿皮乙酸对K562［3］、LiBr［4］、HT1080［5］和 HL60［6］等肿瘤细胞的生长也有明显的抑制作用。采用荧光双染法观察到：浓度为10-6mol/L的土槿皮乙酸可使70% K562细胞发生凋亡，凋亡细胞核内DNA纠聚集，凋亡小体增加。土槿皮乙酸对Hela细胞的杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡，其中的机制是通过降低Bcl-2蛋白的表达和增加Bax和P53蛋白来实现的［7］。还有实验证明：土槿皮乙酸通过降低Bcl-2、降低Bcl-xL和ICAD蛋白的表达来增加Bax蛋白作用，来促进A375-S2细胞的凋亡［8］。
2 抗生育作用
皮下、肌注、灌胃或静脉给予土槿皮乙酸的碳酸氢钠溶液对大鼠和家兔都能产生明显的抗早孕作用。用羧甲基纤维素配制的土槿皮乙酸混悬液给大鼠、家兔或狗灌胃，均能产生明显的抗早孕作用, 其抗早孕的有效剂量分别为5mg/kg、40mg/kg和1mg/kg。土槿皮乙酸无雌激素样活性, 外源性孕酮也不能明显地对抗土槿皮乙酸对大鼠的抗早孕作用。其抗早孕的有效剂量能使妊娠大鼠的蜕膜细胞变性，出血和坏死［9］。土槿皮乙酸（50μg/ml）对培养的人蜕皮细胞有杀伤作用［10］。给予土槿皮乙酸, 妊娠大鼠血浆和子宫中的PGE和 PGF 的含量没有明显的变化［11］。妊娠大鼠, 在给妊娠7～9d的大鼠灌胃土槿皮乙酸20mg/kg或30mg/kg, 发现大鼠子宫肌层和内膜层的血流量显著低于对照组［10］。因此，降低早孕大鼠子宫血流量可能是土槿皮乙酸造成胚胎死亡的重要原因。另外，每日1次给大鼠灌胃10mg/kg，连用3d，能够终止大鼠的中期妊娠。土槿皮乙酸对小鼠也有明显的抗早孕作用，其ED50为(128.83±4.27)mg/kg，并且此作用可被甲地孕酮所拮抗。
3 抗血管生成作用
MTT法检测发现土槿皮乙酸 (0.625～5μM) 明显抑制体外初级血管的形成, 用5μM 剂量时抑制率达到97%。石蜡切片经免疫组织化学染色CD31后发现土槿皮乙酸 (8～16mM)显著抑制体内血管生成。土槿皮乙酸 (0.625～20μM)作用24h后对血管内皮生长因子（VEGF）促无血清培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVECs) 的生存抑制率为11.8%～34.5%。DAPI、TUNEL 染色发现经土槿皮乙酸作用后HUVECs 呈现核固缩、边集、DNA断裂等典型的凋亡特征。用流式细胞术定量，发现土槿皮乙酸浓度为2.5μM和5μM时，抑制VEGF促无血清培养的HUVECs的凋亡率分别为28.5%和30.3%［12,13］。
4 抗真菌作用
土槿皮乙酸是土槿皮中的主要抗菌成分, 尤其对念珠菌(Candida)和球拟酵母菌(Torulopsis)有显著效果, 对白色念珠菌(Candida. albicans)有杀菌作用［14］, 其疗效和两性霉素相当。土槿皮乙酸对发癣菌(Trichophyton mentagrophytes)和石膏样小牙胞菌(Microsporum gypseum)也有效。但其甲基化产物和水解后的产物对上述的菌株均无效, 说明侧链18位上的羧基和4位乙酰基为其抗菌活性必需基团。土槿皮乙酸对隐球菌(Cryptococcus neoformans)无效, 而两性霉素对白色念珠菌和隐球菌均有效，说明土槿皮乙酸的作用机制和两性霉素不同。研究表明土槿皮乙酸抗真菌作用的主要成分是羧酸。
肾脏是念珠菌感染的主要靶器官, 所以用减少感染肾脏的白色念珠菌数来评价土槿皮乙酸的抗菌能力。小鼠接种白色念珠菌后18h和48h , 尾静脉给予土槿皮乙酸10mg/kg或20mg/kg, 最后1次给药后24h, 取100 μl稀释的肾匀浆在37℃培养16h后, 给予土槿皮乙酸组的菌落形成单位数 (Colony forming unit, CFU) 与溶媒对照组比较差异有统计学意义。皮下给予土槿皮乙酸, 三个剂量组(3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg) 的CFU数与溶媒对照组比较差异也有统计学意义。
小鼠接种106 CFU白色念珠菌后1、3、5d, 静脉给予土槿皮乙酸10mg/kg, 可显著延长小鼠的存活期。但是腹腔给予土槿皮乙酸（最大剂量40mg/kg，连续7d或14d）对小鼠的存活期却无延长作用。
5 土槿皮乙酸可激活过氧化物酶增殖物激活受体（PPAR）
土槿皮乙酸可激活内源性PPARα［15］和磷脂酶C 的活性，增强过氧化物脂酰氧化酶的活性。土槿皮乙酸激活PPAR和磷脂酶C 的作用可被PKC抑制剂星形孢菌素阻断，说明此作用依赖PKC。和抗真菌、抗肿瘤作用相似, 侧链上的自由羧基和4位乙酰基为其活性所必需, 酯化羧基或脱去4位乙酰基均可显著降低其激活PPAR的作用。作为PPAR的激动剂，其对肿瘤、代谢综合症等的治疗具有一定的研究开发价值。
6 毒性反应
腹腔或静脉给予小鼠土槿皮乙酸，它们的LD50分别为 423mg/kg和316mg/kg。小鼠静脉给予土槿皮乙酸后出现痉挛, 头颈部强直, 5min左右痉挛缓解, 呈无力迟缓状态, 张口呼吸等中毒症状, 3h 后逐渐恢复, 死亡多在24h内。大鼠灌胃给予土槿皮乙酸的LD50为 130mg/kg, 中毒的主要症状为腹泻、厌食等［16］。高浓度的土槿皮酊可完全破坏家兔的胆囊黏膜，引起胆囊壁的慢性炎症和纤维化，使胆囊最终自截。
综上所述，土槿皮乙酸是一种药理作用广泛的药物，具有广阔的开发前景。
【参考文献】
［1］ Pan DJ, Li ZL, Hu CQ, et al. The cytotoxic principles of Pseudolarix kaempferi: Pseudolaric acid-A and B and related derivatives［J］. Planta Med, 1990, 56(4): 383～385.
［2］ Li E, Clark AM, Hufford CD. Antifungal evaluation of pseudolaric acid B, a major constituent of Pseudolarix kaempferi［J］. J Nat Prod, 1995, 58(1):57～67.
［3］ 张敏, 买霞, 陈小义, 等. 土槿乙酸体外诱导K562细胞凋亡的研究［J］. 中草药, 2002, 33 (6):533～535.
［4］ 姜孟臣，陈虹，张敏, 等. 土槿皮乙酸对人黑素瘤细胞增殖抑制作用研究［J］. 中草药, 2003, 34(6): 532～534.
［5］ 姜孟臣，陈虹，张敏, 等. 土槿皮乙酸对人HT1080细胞系增殖抑制的体外研究［J］. 天津药学, 2002, 14(2)：36～38.
［6］ 徐瑞成，刘艳青，买霞，等. 土槿皮乙酸诱导HL60细胞凋亡及其与半胱氨酸蛋白酶-3活化的关系［J］. 实用癌症杂志, 2004，19(4): 344～346.
［7］ 龚显峰，王敏伟，吴振，等. 土槿皮乙酸体外诱导Hela细胞凋亡［J］.中国药学杂志，2005，40（8）：589～591.
［8］ 龚显峰，王敏伟，田代真一,等. 土槿皮乙酸体外诱导A375-S2细胞凋亡［J］.中国中药杂志，2005，30（1）：55～57.
［9］ 王伟成, 陈荣发, 赵世兴, 等. 土槿皮乙酸的抗生育作用［J］. 中国药理学报, 1982, 3(3): 185～188.
［10］ 陈浩洪，顾芝萍，游根娣，等. 人蜕皮细胞培养作为抗早孕药物筛选模型的研究［J］. 上海铁道大学学报, 1998, 19(11):1～3.
［11］ 王伟成, 游根娣, 蒋秀娟, 等. 土槿皮甲酸和土槿皮乙酸的内分泌活性和它们对性激素、前列腺素、子宫、胎儿的影响［J］. 中国药理学报, 1991, 12(2):187～190.
［12］ 王伟成, 顾芝萍, 顾克仁, 等. 土槿皮乙酸对妊娠大鼠子宫内膜及肌层血流量的影响［J］. 中国药理学报, 1991,12(5): 423～425.
［13］ 谭文福，李美红，陈弈，等. 土槿皮乙酸抑制血管生成及VEGF诱导的促内皮细胞生存作用［J］. 中国药理通讯, 2003,20(1): 59～60.
［14］ Tan WF, Zhang XW, Li MH, et al. Pseudolarix acid B inhibits angiogenesis by antagonizing the vascular endothelial growth factor-mediated anti-apoptotic effect［J］. Eur J Pharmacol, 2004, 499(3)：219～228.
［15］ Jardat MS, Noonan DJ, Wu B, et al. Pseudolaric acid analogs as a new class of peroxisome proliferator-activated receptor agonists［J］. Planta Med, 2002, 68(8): 667～671.
［16］ 王伟成，陆荣发，赵世兴，等. 土槿皮甲酸和乙酸抗早孕作用和毒性的比较［J］. 中国药理学报, 1988, 9(5):445～448.
作者单位：海南慧谷药业有限公司,海南 海口 570200.