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【摘要】 目的 探讨顶空气相色谱法定量测定紫杉醇注射液中乙醇含量的可行性。 方法 采用顶空进样毛细管气相色谱法，顶空平衡温度100℃，平衡时间30min，HP- 5 毛细管为色谱柱，柱温初始为60℃，保持6min，然后以60℃·min-1的速率升温至180℃，保持5min，氮气为载气, 流速2.0ml·min-1。 结果 乙醇与内标物正丙醇分离效果理想；乙醇浓度在0.791～3.164mg·ml-1范围内线性关系良好，r =0.9999；精密度实验RSD为0.67%；平均回收率100.3%，RSD为0.36%。 结论 顶空气相色谱法快速、灵敏、准确，可用于测定紫杉醇注射液中的乙醇含量。
【关键词】 顶空气相色谱法 紫杉醇注射液 乙醇 含量测定
紫杉醇（Paclitaxel）为临床常用的抗癌药，对卵巢癌、乳腺癌、子宫癌等具有良好疗效。紫杉醇不溶于水，为提高溶解度和稳定性，一般以聚氧乙烯蓖麻油无水乙醇溶液(V:V = 50∶50)为溶剂制成注射液使用。目前市面上常用的紫杉醇制剂，如进口的Taxol、Anzatax，以及国产的紫素、泰素等，均采用常规气相色谱法测定中的乙醇含量；但由于所采用的内标物正丙醇与乙醇的分离效果不佳，在一定程度上干扰了乙醇含量的准确测定［1］。采用顶空气相色谱法测定紫杉醇注射液中的乙醇含量，并进行了专属性、线性、稳定性及回收率实验等方法学研究。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 仪器与试药 Agilent公司6890 气相色谱仪及7694 顶空进样器。无水乙醇及正丙醇均为分析纯，广州化学试剂厂出品。紫杉醇注射液（商品名Anzatax，规格25ml:150mg，批号P116856），澳大利亚Faulding公司出品。
1.2 方法
1.2.1 色谱条件 HP-5毛细管柱( 30m×0.32mm×0.25μm)； 氮气(99.999%)为载气，流速2.0ml·min-1；柱温：60℃保持6min，以60℃·min-1的速率升温至180℃，保持5min；进样口温度：180℃，分流比10:1；检测器：FID，200℃；顶空进样器：顶空瓶温度100℃，平衡时间30min，传输管温度：110℃，定量管温度：110℃，加压时间：0.5min，进样时间：1min。
1.2.2 溶液的制备
1.2.2.1 内标溶液 精密量取正丙醇5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
1.2.2.2 对照品溶液 精密量取20℃放置恒温的无水乙醇5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml与内标溶液5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量2ml置顶空瓶中，密封瓶口，即得。
1.2.2.3 供试品溶液 精密称取紫杉醇注射液约10g，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml与内标溶液5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量2ml置顶空瓶中，密封瓶口，即得。
2 结果
2.1 系统适用性 精密量取20℃放置恒温的无水乙醇3、4、5ml，分置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml（每个浓度5份）与内标溶液5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml置顶空瓶中，密封瓶口，进样分析。结果RSD为0.90％，符合中国药典的要求。
2.2 专属性考察 取对照品溶液及供试品溶液按上述色谱条件进样分析，记录色谱图。结果乙醇的保留时间为1.6min，正丙醇的保留时间为2.0min，分离度为9.0，分离度理想。空白溶剂（聚氧乙烯蓖麻油）不干扰测定。
2.3 线性实验 精密量取20℃放置恒温的无水乙醇5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2、3、4、5、6、7、8ml，分别置100ml量瓶中，各精密加入内标溶液5ml，加水稀释至刻度，摇匀，精密量2ml置顶空瓶中，密封瓶口，进样测定各色谱峰的面积，计算与内标物正丙醇的峰面积比(F)。以浓度为横坐标，峰面积比（F）为纵坐标，绘制标准曲线。经计算回归方程为Y=0.2636X+0.0056，r=0.9999（n=7）。结果表明乙醇浓度在0.079～3.164mg/ml-1范围内与峰面积比(F)呈良好的线性关系，可满足测定要求。
2.4 精密度实验 取线性关系1.978mg·ml-1浓度的溶液，照上述条件，连续进样6次，记录色谱图，计算乙醇和正丙醇峰面积比的RSD，结果为0.67%。
2.5 重复性试验 取供试品溶液6份，照上述条件进样分析，记录色谱图，计算乙醇含量。结果分别为42.8%、42.9%、42.4%、43.0%、42.6%、42.3％，平均值为42.7％，RSD为0.67％。
2.6 稳定性试验 取重复性试验项下的供试液溶液1，分别于0 、2 、4 、6 、8、12h，精密量取2ml，置顶空进样瓶中，照上述条件进样，记录色谱图，计算乙醇含量。结果乙醇含量在12h内平均值为42.4%，RSD=1.35%。
2.7 加样回收试验 精密量取20℃放置恒温的无水乙醇4、5、6ml，分置200ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；精密称取已知乙醇含量的紫杉醇注射液（批号：P116856）5.0g，共9 份，分置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，精密加入对照品贮备液（每一浓度3份）与内标溶液5ml，加水稀释至刻度，摇匀，精密量2ml置顶空瓶中，按上述条件分别进样，记录色谱图，计算乙醇回收率。结果见表1。
表1 回收率试验结果（略）
3 讨论
3.1 紫杉醇注射液中，溶剂为聚氧乙烯蓖麻油无水乙醇溶液( V:V = 50∶50)。由于聚氧乙烯蓖麻油较为粘稠，当采用常规气相色谱法直接进样测定时，其易吸附于柱子内，影响乙醇的洗脱，致使乙醇与内标物正丙醇的分离效果不佳，从而干扰了乙醇含量的测定。
3.2 因乙醇及正丙醇的沸点较低，而聚氧乙烯蓖麻油的沸点较高，故选用顶空进样法测定乙醇含量。经方法学验证，表明该法可有效分离乙醇与正丙醇，线性、精密度、回收率实验结果理想，可替代常规气相色谱法用于定量测定紫杉醇注射液中的乙醇含量。
3.3 根据乙醇沸点低、易挥发的特性，本文中对照品溶液参照中国药典［2］进行配制，即将乙醇放置至20℃恒温取样，计算时采用密度进行换算。验证结果表明，此操作简便可行。
【参考文献】
［1］ 潘邻霖, 董敬，王思玲.紫杉醇注射液的制备及其物理稳定性的初步评价［J］.沈阳药科大学学报，2004，21（2）：101～104.
［2］ 国家药典委员会.中国药典2005 年版二部［M］.北京：化学工业出版社,2005.
作者单位：海南省药品检验所,海南 海口 570216.