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【摘要】 目的 了解海南省近3年艾滋病病毒（HIV） 抗体初筛阳性标本的复检及确认情况,促进实验室网络检测能力提高。 方法 对海南省2004～2006年3年艾滋病筛查实验室初筛阳性送检样本及本室初筛阳性的428份样本进行复检与确认，并对其检测结果分析比较。 结果 经本室酶联免疫吸附试验（ ELISA）复检，由各筛查实验室送检的428份中，有85份HIV抗体阴性（85/414, 20.5%），其中2004年21份（占当年21.4%）、2005年44份（占当年26.2%）、2006年20份（占当年13.5%）；两种ELISA或一种ELISA和一种快速法（雅培硒标或富士PA）均为阳性的240份，一种ELISA或一种快速法为阳性的103份, 经WB试验确认277份为HIV-1抗体阳性（80.8%）,13例阴性 （3.8%）,53例不确定（15.4%）。13例阴性样本中,ELISA 法检测假阳性10例,快速法3例。两种ELISA或一种ELISA和一种快速法双阳性与WB的阳性符合率为93.3%。 结论 应进一步加强实验室规范化管理,消除引起初筛试验假阳性结果因素。
【关键词】 HIV 抗体 ELISA RT WB
Results of re-check and confirmation of positive samples of HIV initially serologically screened in Hainan Province in 2004～2006.
FU Peng, WANG Zhao-qian, HU Yu-luan ,et al.
（Hainan Provincial Center for Disease Control and Prevention, Haikou 570203, Hainan, P. R. China）
Abstract：Objective To understand the results of re-checking and confirmation of samples positive for antibody to HIV screened in Hainan province fromn 2004 to 2006 and enhance the ability of laboratory network. Methods There 414 screeened samples positive for antibody to HIV were re-checked and confirmed by screening laboratories in Hainan province in 2004～2006. The results were compared and analyzed. Results All the 414 samples were re-checked by ELISA and 85 samples were negative （20.5%）, inclduing 21samples collected in 2004, 44 samples collected in 2005 and 20 samples colected in 2006. There 240 samples were positive tested by two ELISA reagents or one ELISA and one rapid testing reagent. The 103 samples were positive tested by one ELISA or one rapid testing reagent. There 277 samples were positive for antibody to HIV confirmed by WB. Of the 13 negative samples 10 were tested by ELISA and 3 by rapid testing method. The results of 53 samples could not be defined. The positive coincidence rate of two ELISA or one ELISA and one rapid method with WB was 93.3%. Conclusion The managment of laboratory be further standardized to enhance the capacity in screening and confirmation of HIV infection in this province.
Key words：HIV; Antibody; ELISA; RT; WB
海南省自1990年至今共在卫生、医疗、教学等部门中设立HIV抗体筛查实验室27家，形成全省检测网络系统。为了解海南省实验室检测情况，指导监测检测工作，现将2004～2006年由筛查实验室上送的及本室初筛阳性标本检测情况分析如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源 2004～2006年海南省各艾滋病筛查实验室送检及本室初筛HIV 抗体阳性反应的血清标本428份。
1.2 材料与方法 所有初筛实验使用的检测试剂均是合格的试剂，复检试验采用酶联免疫吸附试验（ELISA） 双抗原夹心法、明胶颗粒凝聚试验（PA）和胶体金快速法检测。ELISA实验使用试剂有梅里埃、北京金豪、珠海丽珠、上海科华和北京吉比爱试剂；快速试验使用富士PA、雅培硒标试剂，均在有效期内使用,按说明书操作。确认实验采用免疫印迹法（WB）。试剂采用HIV BLOT2.2 （HIV-1/2型）免疫印迹（WB）试剂盒（Genelabs HIV Blot 2.2 WB,Singapore）,在有效期内使用,按说明书操作。仪器采用RT-2600型洗扳机和伯乐680型酶标仪。结果判定按《全国艾滋病检测技术规范》规定的标准执行［1］。
2 结果与分析
2.1 复检结果 经本室酶联免疫吸附试验（ ELISA） 复检，在各初筛实验室送检的428份标本中，有85份标本被判为HIV抗体阴性（85/428, 19.9%），其中2004年21份（占当年21.4%）、2005年44份（占当年26.2%）、2006年20份（占当年13.5%）。详见表1。
2.2 WB确认试验结果 本室复检为阳性的343份样品,经WB试验确认有277份为HIV-1抗体阳性（80.8%）,13例阴性（3.8%）,53例不确定（15.4%）。两种ELISA或一种ELISA和一种快速法双阳性与WB的阳性符合率为93.3%。
2.3 不同的流行病学特征的标本HIV检出情况 在343例复检为阳性反应者中,经WB 确认277 例HIV阳性感染者多为男性吸毒者， 2004年49份（占当年90.3%）、2005年54份（占当年56.3%）、2006年52份（占当年46.4%）。在吸毒者中15～39岁吸毒者占93.4%（155/166）；民族以汉族为主；省内人员占89.9%，主要分布在儋州、三亚、东方和乐东四市县。
表1 428份标本初筛、复检和确认实验结果（略）
注：（）括号内的数字为确证实验室初筛阳性标本
3 讨论
3.1 初筛假阳性的原因分析 艾滋病筛查实验室送检标本经复检试验后为假阳性的原因有以下几方面：（1）试剂研发因素：某些厂家在研发生产试剂的过程中，有意识地提高试剂的敏感性，导致试剂本身敏感性过高而特异性降低造成假阳性；（2）方法学因素：不遵循《全国艾滋病检测技术规范》［1］规定的流程检测，不用两种筛查试剂复核检测就送检上报；（3）检测过程因素：ELISA试剂的生物活性易受检测过程中温度、孵育时间、洗涤等诸多因素影响，人员的技术熟练程度不够直接影响检测结果；（4）质量控制与管理:部分实验室不通过资质认证，实验室质量管理不规范，室内质量控制措施有效性较差,检测时没有使用外部质控血清进行内室质控，仪器设备没有校准检定。针对上述假阳性的问题，实验室除提高本身质量管理水平和人员技术能力外，在试剂方面应选择国家艾滋病参比实验室评估为优秀、特异性和敏感性好的试剂盒，如果使用的检测试剂和确证实验室复检试剂相同，更有利于结果的分析比对，目前海南省CDC机构筛查实验室和确证实验室所用的筛查试剂主要来源于省卫生厅统一采购，对初筛阳性的标本复检时，检测结果的一致性较好，当检测结果不一致时也便于查找和分析原因。
3.2 复检阳性而确认阴性的原因分析 由于筛查诊断试剂的敏感性高而特异性不如确认试剂，故不可避免的会出现复检试验阳性经确认试验为HIV抗体阴性的结果，这往往是由于一些非特异性抗原引起的免疫交叉反应引起的。HIV病毒的抗原与其他逆转录病毒（HTLV） 有交叉反应, HIV感染的淋巴细胞抗原与一些人血清中的HLA抗体有交叉反应等［2］。在复检的414份标本中，经确认为阴性的结果中就发现有3例ELISA试验和快速试验均为阳性的标本。
3.3 复检试验阳性经确认试验为HIV抗体不确定结果分析 据报道，造成不确定的原因主要有：HIV新近感染抗体阳转早期、肝病、自身免疫疾病、输入血制品、肾衰和血透、妊娠、肿瘤、免疫接种等［3］。在53份不确定结果中出现的条带最多为P24（占67.92%,36/53）。5例完成随访复检者，其不确定反应的条带仍存在，按《全国艾滋病检测技术规范》判定为HIV阴性，由于多数没有继续随访复检，同上述病因的关系有待验证。随着近几年来海南省HIV检出率快速增长，实验室为适应艾滋病防治要求，应加强自身能力的建设，促进实验室规范化管理，提高实验室检测质量和检测水平，消除影响结果的各种因素，确保检测结果的准确性和可靠性［4］。又由于实验室提供的检测数据是艾滋病防治措施制定的重要依据之一，检测数据资料不仅要准确，而且要全面，一个没有流行病学背景的阳性结果，它的意义是有限的，因此，实验室要提高自身整体能力，按要求规范化操作，保证检测结果准确全面无误，为艾滋病防治工作提供准确科学的依据。
【参考文献】
［1］ 中国疾病预防控制中心.全国艾滋病检测技术规范（2004年）［S］.2004,08.
［2］ 欧泽惠,张秀兰,王军，等.献血者抗-HIV检测结果误差的原因分析［J］.现代医药卫生,2007,23（6）：893.
［3］ Schupbach J. SHCS and the laboratory diagnosis of HIV infection-from the development of the HIV Western blot to virus quantification and clinically relevant individual virus characterization［J］. Ther Umsch,2004,61（10）:603～607.
［4］ 王敏，潘文利，何启亚，等. 海南省艾滋病流行特征及趋势分析［J］.中国热带医学,2002，2（4）：465～467.
作者单位：海南省疾病预防控制中心，海南 海口 570203.