分支杆菌医院感染株对含氯消毒剂的抗性研究

【摘要】  目的 研究分支杆菌医院感染株与消毒标准株对含氯消毒剂二氯异氰尿酸钠的抗性差异。 方法 以悬液定量杀灭试验观察二氯异氰尿酸钠作用不同时间对2株不同来源的分支杆菌的杀灭效果。 结果 40mg/L的二氯异氰尿酸钠作用1、5、10和20min对分支杆菌医院感染株的杀灭率分别为85.13%、98.86%、99.96%和100%；对消毒标准株的杀灭率分别为84.97%、98.83%、99.92%和99.9999%。 结论 分支杆菌医院感染株和消毒标准株对40mg/L的二氯异氰尿酸钠的抗性无显著性差异。

【关键词】  分支杆菌；消毒标准株；医院感染株；抗性；二氯异氰尿酸钠

Study on the resistance of hospital infective strains and standard strains of Mycobaterium to chlorine-containing disinfectant.

　　LIN Ai-hong, YE Bao-ying, LIANG Zhuo-nan, et al.

　　（Shenzhen Municipal Center for Disease Control and Prevention, Shenzhen 518020, Guangdong, P. R. China）

　　Abstract：Objective  To observe the resistant status of hospital infective strain and standard strain Mycobacterium to sodium dichloroisocyanurate.  Methods  The suspension quantitative germicidal test was carried out to analyze the germicidal efficacy between the two different Mycobacterium strains in different exposure durations to sodium dichloroisocyanurate.  Results  The rates in killing the hospital infective strain of Mycobacterium 1min, 5min, 10min and 20min after exposed to 40mg/L sodium dichloroisocyanurate were 85.13%,98.86%,99.96% and 100% respectively, and that to the standard strains of Mycobacterium were 84.97%,98.83%，99.92% and 99.9999% respectively.  Conclusion  There is litlle differences in resistance of standard strains and hospital infective of Mycobacterium.

　　Key words：Mycobacterium; Standard strain; Hospital infective strain; Resistance; Sodium dichloroisocyanurate

　　结核分支杆菌感染导致的疾病一直严重威胁着人类的健康，近十多年来，非结核分支杆菌引起的感染也日益增多［1，2］，国内外相继出现了大量的非结核分支杆菌引起医院内感染的报道。引起医院内感染增加的原因，除了生物因素、环境因素和营养因素外，医院消毒的不合理、不规范是一个重要原因。消毒剂的使用在杀灭细菌的同时，也诱导其产生对消毒剂的抗性，为了解分支杆菌对消毒剂的抗性变化，我们将脓肿分支杆菌医院感染菌株与分支杆菌消毒标准株进行了抗性试验检测，现将结果报告如下。

　　1  材料与方法

　　1.1  试验材料

　　1.1.1  试验菌悬液制备  试验菌为龟分支杆菌脓肿亚种标准株（ATCC93326），由军事医学科学院提供。脓肿分支杆菌医院感染株为1998年深圳市妇儿医院发生分支杆菌医院感染时病人脓肿分泌物的分离株。取5～6代分支杆菌培养基斜面新鲜培养物（72h），用5.0ml稀释液洗下菌苔，再移至一含有6～7g玻璃珠的无菌锥形底容器中，电动混合器混合至少5min，取该溶液2.0ml加入2.0ml有机干扰物质制成含菌量为1×107～5×107cfu/ml的菌悬液，备用［3］。

　　1.1.2  试验用主要试剂  消毒剂：浓度为40mg/L的二氯异氰尿酸钠泡腾片溶液;中和剂：20mg/L硫代硫酸钠+ 5g/L吐温80的PBS溶液;稀释液：0.1%胰蛋白胨的生理盐水溶液;标准硬水（硬度342mg/L）;有机干扰物：3%牛血清白蛋白溶液。

　　1.1.3  培养基  分支杆菌干燥培养基（上海奥普生物医药有限公司产）。

　　1.2  方法

　　1.2.1  中和剂选择试验  试验分为六组，分别为：①消毒剂+菌悬液；②（消毒剂+菌悬液）+中和剂；③中和剂+菌悬液；④（消毒剂+中和剂）+菌悬液；⑤稀释液+菌悬液（正常菌对照）；⑥稀释液+中和剂+培养基；试验结果,以第1组不长菌或仅有极少数试验菌菌落生长，第2组有较第1组为多，但较第3、4、5组为少的试验菌菌落生长，第3、4、5组组间菌数误差率≤15%，第6组不长菌，表明所用中和剂及其浓度适宜，中和剂及中和产物对试验菌和培养基无不良影响［4］。

　　1.2.2  悬液定量杀菌试验  取消毒试验用无菌大试管，加入1.0ml含有机干扰物质的菌悬液，置（20±1）℃水浴中，5min后，用无菌吸管吸取40mg/L的二氯异氰尿酸钠4.0ml注入其中，迅速混匀并记时。待试验菌与消毒液相互作用至各预定时间，分别吸取0.5ml试验菌与消毒剂混合液加入4.5ml经灭菌的中和剂中，混匀。各试管试验菌与消毒剂混合液经加中和剂作用10min后，分别吸取1.0ml样液，按活菌培养计数方法测定存活菌数，每管样液接种2个平板。如平板上生长的菌落数较多时，可进行10倍稀释后，再进行活菌计数。同时用稀释液代替消毒液，进行平行试验，作为阳性对照。接种后的所有试验样本均放入干净的塑料袋内，在37℃温箱中培养一周，观察最终结果。试验重复3次。

　　1.2.3  统计方法  用SPSS11.0统计软件对实验数据进行统计分析。

　　2  结果

　　2.1  中和剂选择试验结果  试验表明，用含20g/L硫代硫酸钠和5g/L吐温80的PBS溶液中和浓度为40mg/L的二氯异氰尿酸钠，可符合所定要求。见表1。

　　表1  中和剂试验结果（略）

　　注：试验温度为（20±1）℃，消毒液为40mg/L二氯异氰尿酸钠，菌药作用时间为10min，加中和剂后作用10min。结果为3次试验平均值。

　　2.2  悬液定量杀菌试验结果  40mg/L的二氯异氰尿酸钠作用不同时间对悬液中的脓肿分支杆菌医院感染株和分支杆菌消毒标准株的杀灭率见表2，作用1、5、10和20min后，对两株菌的杀灭率差异无显著性（P均>0.05）。

　　表2  40mg/L二氯异氰尿酸钠对脓肿分支杆菌医院感染株和分支杆菌消毒标准株的杀灭率（略）

　　注：试验温度为（20±1）℃，阳性对照组平均菌数脓肿分支杆菌医院感染株为1.24×106cfu/ml，分支杆菌标准株为2.1×106cfu/ml，结果为3次试验平均值。

　　3  讨论

　　消毒剂的广泛使用已有很长的历史，同细菌对抗生素的耐药性一样，细菌长时间接触同一种消毒剂会对该类消毒剂产生抵抗力，即所说的抗性［5］。早在1952年，C.E.Chaplin就发现细菌对消毒剂有一种类似于细菌耐药性的性质［6］，随着社会的发展，消毒剂使用越来越广泛，细菌对消毒剂抗性的问题受到日益广泛的关注。目前认为，消毒剂的滥用、处理方法不当及用量不足是细菌对消毒剂产生抗性的主要原因［7］。为了解医院感染菌株对消毒剂的抗性变化，我们用40mg/L的二氯异氰尿酸钠对脓肿分支杆菌医院感染株和分支杆菌消毒标准株进行了悬液定量杀菌试验，结果40mg/L的二氯异氰尿酸钠作用1、5、10和20min对医院感染株的杀灭率与对消毒标准株的杀灭率比较，经统计学分析，医院感染株对40mg/L的二氯异氰尿酸钠的抗性与标准株无显著性差异。而我们此前的研究结果，该分支杆菌医院感染株对2%强化中性戊二醛的抗性大于消毒标准株［8］，这可能是因为本次研究的菌株长期接触低浓度的戊二醛诱导了抗性，但没有长期接触含氯消毒剂，未对含氯消毒剂产生抗性。

【参考文献】
  ［1］ 周惠.非典型分支杆菌与感染［J］.中华医院感染学杂志,2000，10（6）：423.

　　［2］ Ramaswamy AA, Biswas J,Bhaskar V, et al. Postoperative mycobacterium chelonae endophthalmitis after extracap sular cataract extraction and posterior chamber intraocular lens implantation［J］. Ophthalmology, 2000,107（7）:1283.

　　［3］ 中华人民共和国卫生部.消毒技术规范［S］.2002年版,29.

　　［4］ 王晓辉，张朝武，陈昭斌，等. 4株分支杆菌对一含氯消毒剂抗力的比较［J］.中国消毒学杂志, 2002,19（1）:12～14.

　　［5］ 张本，刘衡川，张朝武，等. 质粒与细菌对消毒剂抗性关系的研究进展［J］.预防医学情报杂志,2003,19（6）:513～515.

　　［6］ Chaplin CE. Bacterial resistance to quaternary ammonium disinfectants［J］. Bacterial,1952,63:453～458.

　　［7］ Nagai I,Ogase H. Absence of role for plasmid in resistance to multiple disinfectants in three strains of bacteria［J］. J H osp Infect,1990,15:149～155.

　　［8］ 林爱红，张朝武，叶宝英，等. 分支杆菌医院感染株与消毒标准株对高效消毒剂戊二醛的抗性研究［J］.现代预防医学,2005,32（3）:243～244.

作者单位：深圳市卫生科技计划课题（编号200405169） 深圳市疾病预防控制中心,广东 深圳 518020; 四川大学华西公共卫生院,四川 成都 610041.