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【摘要】 目的 探讨抗核抗体(ANA) 、抗可提取性抗原多肽抗体谱( ENA) 、抗双链DNA抗体(dsDNA) 、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)和抗心磷脂抗体（ACA）在狼疮性肾炎诊断及治疗中的意义。 方法 采用免疫荧光法测定ANA , 蛋白芯片法测定ENA 多肽抗体谱,金标法测定抗ds-DNA 抗体,间接免疫荧光法测定ANCA，酶标法测定ACA，并对结果进行分析。 结果 狼疮性肾炎患者组这五项指标都高于正常对照组,二者显著有统计学意义(P< 0. 01) ,但这五项指标对SLE诊断的准确性、敏感性和特异性各不相同。 结论 ANA 作为狼疮性肾炎最重要的一类抗体,可作为初筛指标,ENA 7 个位点抗体检测提高ANA 的敏感性与特异性,dsDNA 抗体可作为治疗监测的指标,ANCA 对病情活动监测有意义,抗心磷脂抗体( ACA)是一种自身抗体,与其他自身抗体联合测定对于狼疮性肾炎的早期诊断、监测、治疗更有意义。
【关键词】 狼疮性肾炎 ANA ENA 抗双链DNA抗体 ANCA ACA
Significance of five autoantibodies in patients with lupus nephritis.
ZHONG Lu, FU Ke-ying, CHEN Ru, et al.
( Hainan Provincial People’s Hospital, Haikou 570311, Hainan, P.R. China )
Abstract：Objective To discuss the significance of anti-nuclear antibodies(ANA), Anti-brine extracted antigen peptide antibody spectrum(ENA), Anti-dsDNA (dsDNA), Anti-neutrophil cytoplasmic antibodies(ANCA),Anti cardiolipin antibodies(ACA), in diagnosis, monitoring and treatment of lupus nephritis . Methods Using immunofluorescence method ,ANA, protein chip ENA peptide antibody spectrum, colloidal gold labeled anti-dsDNA antibody were determined; ANCA was determined with indirect immunofluorescence method, ACA was determined with ELISA. Results The five indicators in lupus nephritis patients in this group were higher thanthe normal controls, showing significant differences (P<0. 01). Conclusion ANA as an principal antibody in lupus nephritis can taken as an indicator in initial screening. The detection of ENA at seven point can increase sensitivity and specificity in detection of ANA antibody, dsDNA antibody can be used as indicators for monitoring, ANCA is meaningful in monitoring of disease activity, ACA (ACA) is a self - antibodies, common in SLE and other autoimmune diseases and ACA is expressed differently in lupus nephritis patients and the joint detection of ACA is helpful fro early diagnosis, monitoring and treatment of lupus nephritis.
Key words：Lupus nephritis; ANA; ENA; Anti-dsDNA; ANCA; ACA
自身免疫性疾病中存在一些对疾病诊断具有高度特异性的自身抗体,如ANA 是检测SLE的最重要一种抗体,早已广泛应用于临床, ENA 抗体与抗ds - DNA 抗体都是抗核抗体的一种,都是近些年被临床采用的诊断指标［1～2］。它们更具体针对不同核抗原,因此敏感性特异性也更强,而ANCA 是一组针对中性粒细胞胞浆抗体的自身抗体［2］。它于1982 年首次被发现后开始应用于临床。ACA是近年来发现的一种自身抗体,不少学者报道常见于系统性红斑狼疮及其他自身免疫性疾病［2］,该抗体与血栓性疾病、习惯性流产、心肌梗死、川崎病作者对这五种抗体进行了分析比较,现将结果报告如下。
1 材料和方法
1.1 临床资料
1.1.1 病例组 狼疮性肾炎病人47 例,为近两年在我院肾病科、儿科、住院或门诊病人,诊断符合1982 年美国风湿病协会修订的SLE诊断标准。其中女性31 例,男性6 例,年龄8～70 岁。所有病人都有蛋白尿，血肌酐和尿素氮从正常到不同程度的增高。
1.1.2 对照组 40 例体检身体健康者,来至本院职工,男性4 例,女性36 例,年龄19～60 岁。
1.2 方法 ANA 测定用免疫荧光法, 采用北京欧蒙公司产品; ENA多肽抗体谱测定用蛋白芯片法,采用南京大渊公司试剂盒; 抗ds - DNA 抗体测定利用胶体金标记, 采用广州万孚公司试剂盒; ANCA测定用免疫荧光法, 采用北京欧蒙公司试剂盒。ACA测定用ELISA法, 采用深圳安群公司酶标试剂盒。
2结果
2.1 狼疮性肾炎患者与正常对照五项检测指标比较,狼疮性肾炎患者组四项指标阳性率高于正常对照组,两组比较有显著性差异(P< 0. 01) ,见表1。
表1 狼疮性肾炎患者与正常对照五项检测指标比较（略）
2.2 ANA阳性狼疮性肾炎患者抗ENA 抗体的各项指标比较 抗ENA 多肽抗体谱共检测7 种抗体,结果见表2。
表2 狼疮性肾炎患者抗ENA抗体的各项指标比较（略）
2.3 ANA阳性狼疮性肾炎患者ACA的各项指标比较
表3 狼疮性肾炎患者抗心磷脂抗体的各项指标比较（略）
3 讨论
狼疮性肾炎病人在细胞免疫和体液免疫方面都有很多异常,其中自身抗体的出现在狼疮性肾炎的发病和诊断上均有十分重要的意义。自身抗体主要有3 类,即抗核抗体、抗胞浆抗体与类风湿因子;其中抗核抗体是SLE中最重要的一类抗体。根据核荧光的类型分为以下几种类型：1，周边型（M型）：核周边的荧光增强呈环状。M型的ANA主要有抗双链DNA抗体组成，故高滴度的M型ANA几乎仅见于SLE，因此有助于SLE的诊断。2，均质型（H型）：整个细胞核呈一片模糊而均匀的荧光。H型的ANA主要有抗脱氧核蛋白抗体组成。高滴度的H型ANA主要见于SLE，而低滴度H型ANA偶可见于药物性狼疮，JRA等其他自身免疫性疾病。抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA) 发现较晚,是Davies 等［3］人于1982 年首次在一组坏死性肾小球肾炎患者血清中发现的。ANCA 是针对中性粒细胞胞浆抗原如蛋白酶3(PR3) 、髓过氧化物酶(MPO) 、乳铁蛋白酶(L F) 及弹性蛋白酶、组织蛋白酶G等而产生的一类自身免疫性抗体［2］。据文献记载,95 %～100 %的SLE 患者可检出抗核抗体,且检出率与疾病活动状态有关［4］。结果SLE患者ANA 阳性率为88. 63 % ,比文献记载稍低。作者认为可能与实验操作的各个环节有关,如小鼠肝印片的制作与保存等因素。另外,ANA 检测的特异性不高,在干燥综合症、硬皮病及慢性活动性肝炎等自身免疫性疾病中均可出现一定的阳性率。抗核抗体根据作用于核抗原成分的不同,又可分为一系列的抗体谱。其中ENA 多肽抗体谱就包含多种抗核抗体,所用的试剂盒可同时检测7 种ENA 抗体,可以识别ENA 表位,从而提高了ANA的敏感性与特异性。作者报告的44 例狼疮性肾炎患者中有2 例ENA 抗体阳性而ANA 呈阴性,就说明了这一点。测定的7 种ENA 抗体中,抗Sm 抗体阳性率为37. 5 % ,与文献报告一致［4］ 。抗Sm 是SLE的特异性标志之一,在其他疾病中罕有阳性,可能是SLE的一种回忆性抗体,所以在非活动期也可测出,这说明ENA 多肽抗体谱不能作为病程监测的指标,但对SLE回顾性诊断有一定价值。Sm 抗体常伴有抗U1 - RNP 抗体阳性。结果显示9 例抗Sm 抗体阳性中5 例伴有抗U1 - RNP 抗体,这是由于Sm 与RNP 抗原均参与细胞内mRNP 的剪接加工, 与mRNP 的成熟有关［6］。抗ds - DNA 抗体对诊断狼疮性肾炎(SLE) 有特异性且较敏感,结果显示有两例患者抗ds - DNA 抗体较ANA抗体出现早,可见抗ds - DNA 抗体的检测可用于狼疮性肾炎的早期诊断。此外,作者还发现几例经过治疗病情稳定的狼疮性肾炎患者抗ds - DNA 抗体的滴度明显下降甚至转阴,与ANA 结果一致,这可见抗ds -DNA 抗体与ANA 一样,也与疾病的活动状态有关,这可作为治疗监测的指标之一。但据文献载,亦有少数患者抗ds - DNA 抗体可长期阴性,应作其他项目检查并结合临床表现再作诊断［4］。狼疮性肾炎患者,ANCA 阳性主要为P —ANCA, 其特异性抗原为乳铁蛋白酶。Lee 等用EL ISA 方法检测79 例SLE患者的血清标本,发现乳铁蛋白酶(L F) ANCA 阳性率为39. 2 % ,与SLE病程、发病及疾病活动均呈正相关,从而认为检测ANCA 可以作为监测狼疮性肾炎(SLE) 病情活动的一种手段［5］。作者所测定的44 例狼疮性肾炎患者中,有28 例为阳性,阳性率为63. 6 %。在这28 例阳性患者中,ANCA滴度由1∶20～1∶640 不等;其中1∶20 的有11 例,大于等于1∶40 的有17 例。结合临床诊断,发现抗体滴度与疾病活动有一定关系,即滴度越高,疾病处于活动期可能性越大。作者所测定的9 例滴度1∶80 或更高的患者经临床确诊都处于活动期,在滴度为1∶20 的11 例患者中只有3 例处于活动期,说明ANCA 不仅对狼疮性肾炎的诊断而且对病情活动的监测都有一定的意义。ANA、ENA 多肽抗体谱、抗ds - DNA 抗体、ANCA及ACA 这五项检测指标对SLE的诊断各有其特殊意义［3］。它们的联合测定更有利于全面地分析病情所处的阶段,监测病情的发展情况和治疗效果,提高诊断的准确率,又使特异性敏感性大大增强。特别提出的是我们的实验结果表明ACA(IgM)在狼疮性肾炎的病人中有显著的改变可见于病情活动的病人,说明其具有显著的意义,同时ACA(IgM), ACA(IgG)和ACA(IgA)的同时阳性给我们提出了一个新的课题,其具有什么样的临床意义有待我们进一步探讨。
【参考文献】
［1］ Fernandez SH, Kikuchi's lymphadenitis (necrotizing lymphadenitis) and systemic lupus erythematosus: a case report［J］. Malays J Pathol. 2000 Jun;22(1):25～29.
［2］ De Bellis A, Bizzarro A, Pivonello R, et al, Prolactin and autoimmunity. Pituitary. 2005;8(1):25～30.
［3］ Davies DJ. Segmental necrotizing glomerulonephritis withantineutrophil antibody :Possible arbovirus aetiology［J］.BrMed J ,1982 , 285 :606.
［4］ Tan EM ,Chan EKL , Sullivan KF , et al. Antinuclear anti2 bodies(ANAs) : Diagnostical specific immune markers and clues toward the understanding of systemic autoimmunity ［J］.Clin Immunol Immunopathol ,1988 ,47 :121.
［5］ 戴慧光,李慧珠. 抗中性粒细胞胞浆抗体与系统性红斑狼疮［J］.国外医学:皮肤性病学分册,1997 ,23 (6) :341.
作者单位：海南省人民医院, 海南 海口 570311.