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【摘要】 目的 研究NONI果汁饮料中黄酮含量的测定方法。 方法 采用分光光度法，对Noni果汁中黄酮洗脱剂种类和浓度进行选择和优化。 结果 以40%左右的乙醇对Noni果汁中黄酮进行洗脱，分离效果最好，并测试Noni冻干粉、野生Noni发酵果汁、菠萝Noni复合饮料、种植Noni果汁的黄酮含量分别为0.38％、0.11％、0.069％与0.035％。 结论 建立的方法简便、易于操作，能准确检测各类Noni果汁饮料中黄酮的含量。
【关键词】 Noni;冻干粉;发酵果汁;混合果汁;黄酮
Noni ，又名海巴戟，别名海巴戟天，学名Morinda Citrifolia,为茜草科巴戟天属热带常绿多年生小乔木热带常绿浆状复果，多年生阔叶小乔木。发源于太平洋南部岛屿，当地居民称之为 Noni（诺梨）。Noni作为保健及药用饮料已有上千年历史，特别是在太平洋南部岛屿上，如塔希提岛的波利尼西亚、马来西亚、澳大利亚和夏威夷的土著民就是以Noni为日常保健饮料,已成为不可缺少的必备品。 夏威夷土著早在数千年前已懂得利用Noni来帮助改善精神不振, 消化不良 , 扭伤烧伤及高血压和过敏症。据报道,现代工艺提取的Noni果汁还能够清血排毒, 提高免疫力, 缓解疼痛, 帮助治疗关节炎，胃溃疡，糖尿病和血管硬化等。海巴戟果实的药理作用大,可制为一种新型保健药,在泰国、缅甸和美国都已开发出多种保健饮料食品,价格非常昂贵［1］。为此，我们采用分光光度法对海南野生的Noni发酵果汁、人工种植的Noni发酵果汁、混合饮料及冻干粉的总黄酮进行了检测，以利于其功效成分的比较［10］。
1 材料与方法
1.1 材料 Noni野生发酵果汁（将采自海南三亚荔枝沟经发酵、过滤后而得）; Noni冻干粉（将万宁种植的Noni果实冷冻干燥后磨粉）; Noni种植果汁（将冻干粉加水按1：10稀释）; Noni混合饮料：Noni发酵果汁（种植）与菠萝、芒果混合，经均质、灌装、杀菌而成; 芦丁标准品：Rutin，美国Sigma公司，紫外分光光度计，上海精密科学仪器有限公司。
1.2 方法
1.2.1 样品处理 称取约40ml样品，准确称取其重量。用氯仿分萃取三次。称取经预处理的大孔离子树脂，湿法装柱，不间断地用水饱和，待洗脱柱完全沉淀，稳定。吸取已称取好的液体样品约10ml，沿层析柱慢慢滴入柱内，分别用不同浓度乙醇洗脱，至流出液基本无色。
1.2.2 标准曲线的制备 精密吸取标准芦丁标准溶液(200μg/ml)0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml,相当于0.27、45、90、135、180μg分别置于10ml比色管中,各加甲醇至5ml,加5%NaNO2溶液0.5ml,摇匀放置6min,再加10%Al(NO3)3溶液0.5ml,摇匀,再放置6min,加4%NaOH溶液4ml,摇匀放置10～20min,在510nm波长处,以第一管溶液作空白分别测定吸光度,以吸光度对浓度进行回归,绘制标准曲线。
1.2.3 样品的测定 精密吸取样品提取液2.00ml于10ml比色管中,加30%乙醇至5ml, 加5%NaNO2溶液0.3ml,摇匀放置5min,再加10%Al(NO3)3溶液0.5ml,摇匀,再放置6min,加4%NaOH溶液2ml, 摇匀放置10～20min,用30%乙醇定容至刻度。在510nm波长处,以第一管溶液作空白分别测定吸光度。同时精密吸取样品提取液2.00ml于10ml比色管中,加30%乙醇至5ml,再加1ml水,4ml 4%NaOH溶液,作样品空白。
结果计算：X=m1×V2m×V1×106×100％
X—样品总黄酮含量(g/100g或g/100ml)
m1—依据标准曲线计算出被测液中黄酮含量(μg)
m—试样的质量或体积(g或ml)
V1—待测液分取的体积(ml)
V2—待测液的总体积(ml)
2 结果
2.1 洗脱剂种类的选择 黄酮类化合物是广泛存在于自然界的、泛指两个苯环通过三个碳原子相互联结而成的一系列化合物,包括黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、查尔酮、异黄酮类等化合物。由于没有对海巴戟果汁或海巴戟发酵果汁中黄酮含量具体的测定方法的报道，为此用极性、浓度不同的有机溶剂对样品进行萃取。
常用有机溶剂的极性由强到弱的顺序为(水)、乙腈、甲醇、乙酸、乙醇、丙酮、二氧六环、正丁醇、正戊醇、异丙醇、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、硝基甲烷、二氯甲烷、苯、甲苯、二甲苯、四氯化碳、二硫化碳、环已烷、正已烷(石油醚)和正庚烷。根据硅选择药品使用频率最高的甲醇、乙醇、氯仿做洗脱剂的选择。根据在硅胶板上做薄层色谱(TLC)，选用了氯仿、甲醇、乙醇做洗脱剂，氯仿、甲醇都不能将样品分离而乙醇做洗脱剂可明显分离，再使用20%、40%、60%、70%的乙醇溶液时发现，浓度为40%和60%的分离效果更好。
2.2 标准曲线的制定 准确称取经105℃干燥至恒重的芦丁标准品5.4mg，加甲醇溶液并定容至100ml，配成54μg/ml的芦丁标准溶液。按照本文上述的检测方法测其吸光度(A)，得回归方程y = 0.1097x+0.0073,其中X为芦丁标准溶液体积(ml)，Y为吸光度(A)。
2.3 不同浓度乙醇对样品进行梯度洗脱 分别0%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%的乙醇对野生Noni果汁、种植的Noni果汁进行梯度洗脱，对吸光度的影响见图1。
图1 不同浓度乙醇洗脱对吸光度的影响（略）
从图1可知，乙醇浓度在40％左右时无论在对野生还是种植Noni果汁进行洗脱时，40％乙醇洗脱液所测得的吸光度最大。为此，选择乙醇浓度40％为Noni果汁最佳洗脱浓度。
2.4 40％乙醇对几种Noni果汁的洗脱 称取样液用氯仿萃取三次后，湿法上柱。萃余相开始用蒸馏水洗脱，接着用最佳浓度40％的乙醇洗脱。不同Noni果汁中黄酮的含量见表1。
表1 几种Noni果汁的黄酮含量测定结果（略）
由表1可知黄酮含量Noni冻干粉>野生Noni果汁>菠萝Noni复合饮料>种植Noni果汁；黄酮含量分别为：0.38％、0.11％、0.069%与0.035%。
3 讨论
椐报道，Noni主要成分为:7-羟基-6-甲氧基香豆素、钾、Vc、萜类化合物、生物碱、蒽醌、β-谷甾醇、胡萝卜素、Va、黄酮糖基类、亚麻酸、茜素、氨基酸、山羊酸、辛酸、对苯二氨酸、芸香苷等。海尼克博士认为海巴戟含有丰富的赛洛宁原“Proxeronine”及“Proxeronase”赛洛宁转化酶。这2种成份是赛洛宁“Xeronine”的前物质。并对其申请了专利,认为其带蛋白酶活性,具强烈的抗衰老作用［2～4］。海巴戟性喜高温多雨气候，适宜在年平均温度21～27℃，年降雨量1 500～2 000mm，相对湿度70％以上的无霜区栽培。不耐低温，当出现5℃低温时叶片发黄，若温度再低叶片会发黑。在海南三亚、万宁等地一直有野生的海巴戟生长，海巴戟生长十分粗放，可以生长在海边泥滩，也可生长在冲积壤土和砖红壤土上，pH6.0～7.0，喜光，不耐干旱。海南的气候十分适合海巴戟的生长［3］。海巴戟的叶对生,矩圆状椭圆形或宽椭圆形,基部阔楔形;头状花序单生,球形,少长椭圆形,两性花。聚合果长卵形或球形,成熟时白色或淡黄色,柔软。果内有扁平卵形种子,多达上百粒，繁殖力很强。目前，海巴戟的繁殖栽培技术已成熟,在海南已有多个公司通过引进美国海巴戟优良栽培品种进行标准化种植。
冯丁山等对Noni的果汁进行了毒性实验研究，表明果实无毒［7］。由于黄酮类化合物是广泛存在于自然界，很多黄酮类化合物具有生理活性,例如芦丁、槲皮素等能够增强心脏收缩,减少心脏搏动数；杜鹃素具有止咳祛痰作用;黄芩苷具有抗菌消炎作用;汉黄芩素具有抑制肿瘤细胞作用；水飞蓟素具有保肝作用等［8］。
本文测定Noni果汁饮料中黄酮含量的方法是先采用柱色谱法提取，后采用分光光度法。这种方法所用仪器简单，便于操作。采用的最佳的洗脱剂是40％的乙醇溶液。通过检测表明Noni冻干粉、野生Noni果汁、菠萝Noni复合饮料、种植Noni果汁，黄酮含量分别为：0.38％，0.11％，0.069％，0.035％。
【参考文献】
［1］ 韦丽君,吕平,苏文潘,等.海巴戟研究进展［J］.广西热带农业,2006,2：37～39.
［2］ Wang MY, Anderson G,Nowicki D. Preventive effect of Morinda citrifolia (Noni) at the initiation stage of mammary breast cancer induced by 7, 12-dimethy ibenz(a) anthracen(DMBA) in female Sprague-Dawley rats. The Proceedings of the Frontiers in cancer prevention research, AACR, Boston,2002 Oct 17.
［3］ Wang MY, Su C, Nowicki D, et al.Morinda citrifolia and cancer prevention［J］.Nutrition 2001,131(11S):3151S.
［4］ Hirazumi A, Fususawa E. An immunomodulatorypolysaccharide- rich substance from the fruit juice ofMorinda citrinfolin(Noni) with antitumor activity［J］.Phytotherapy Research,1999,13(5):380～387.
［5］ 何明霞,杨清.海巴戟的引种栽培及发展前景［J］.中国热带农业,2006,04:28～29.
［6］ 韦丽君,吕平,苏文潘,等.海巴戟的组织培养及快速繁殖［J］.植物生理学通讯, 2006,42(3):475.
［7］ 冯丁山,赵毓梅,郑定仙,等.诺尼果汁的毒性实验研究［J］.中国热带医学,2006,6(5):886～893.
［8］ 王光亚.保健食品功效成分检测方法［M］.北京：中国轻工业出版社，2002,39～31.
作者单位：海南大学食品学院,海南 海口 570208.